HomeРазноеБолезнь лейла: Лайла болезнь

Болезнь лейла: Лайла болезнь

Содержание

В России 1500 человек страдают муковисцидозом — Российская газета

Муковисцидоз — заболевание редкое. Стоит ли оно такого внимания, какое уделяется ему в последнее время? Об этом беседа с директором НИИ профилактической педиатрии и восстановительного лечения Научного центра здоровья детей РАМН профессором Лейлой Намазовой-Барановой.

Российская газета: Лейла Сеймуровна, название болезни мало известно. Потому, видимо, надо сказать, что это за напасть такая?

Лейла Намазова-Баранова: Это наследственное заболевание. Из-за дефекта (мутации) гена CFTR секреты во всех органах очень вязкие, густые. Их выделение затруднено. В легких уже в первые месяцы жизни ребенка развиваются воспалительные процессы. Цифра больных муковисцидозом 1500 человек — официальная, но, думаю, не из точных. По статистическим выкладкам, их количество должно быть гораздо выше! Но дело не в цифрах, не в редкости болезни, а в том, какие мучения она приносит.

РГ: Можно ли на ранних сроках беременности распознать недуг?

Намазова-Баранова: На 10-12-й неделе беременности можно выявить заболевание плода. Но необходимо учитывать: диагностика проводится при уже наступившей беременности, поэтому в случае положительного результата родителям необходимо принять решение о сохранении или прерывании беременности.

РГ: Как проявляет себя болезнь?

Намазова-Баранова: Один из первых симптомов — тяжелый, мучительный кашель, одышка. Нарушаются вентиляция и кровоснабжение в легких. Потому в них развиваются воспалительные процессы. Больные страдают бронхитом, пневмонией иногда уже с первых месяцев жизни. Из-за недостатка ферментов поджелудочной железы плохо переваривается пища. У детей повышенный аппетит, а в весе и росте они отстают. Из-за застоя желчи у некоторых развивается цирроз печени, могут сформироваться камни в желчном пузыре. Болезнь поражает все железы внутренней секреции. В зависимости от ее формы в первую очередь страдают либо бронхолегочная, либо пищеварительная система. Чаще всего наблюдается смешанная форма муковисцидоза с одновременным поражением желудочно-кишечного тракта и органов дыхания. Опасны осложнения: нарушение обмена веществ, кишечная непроходимость, мочекаменная болезнь, сахарный диабет, цирроз печени, хроническая пневмония. Впоследствии формируются пневмосклероз и бронхоэктазы, появляются симптомы «легочного сердца», легочная и сердечная недостаточность.

РГ: А умственное развитие при этом страдает?

Намазова-Баранова: Нет. Больные муковисцидозом умственно совершенно полноценны. Более того, среди них много по-настоящему одаренных и интеллектуально развитых детей. Особенно им удаются занятия, которые требуют покоя и сосредоточенности: они изучают иностранные языки, много читают и пишут, занимаются творчеством, из них получаются замечательные музыканты, художники.

РГ: Болезнь заразна?

Намазова-Баранова: Нет! Она передается только на генетическом уровне. Муковисцидоз может протекать довольно долго и бессимптомно. В 4 процентах случаев его диагностируют в зрелом возрасте. Но чаще всего он проявляется в первые годы жизни. 50-60 процентов больных детей умирают, не дожив до совершеннолетия. А до появления высокотехнологичных средств диагностики и лечения такие ребятишки редко доживали до 8-9 лет. И теперь полностью победить болезнь невозможно. Но при условии современного и постоянного лечения человек с таким диагнозом может и должен прожить долгую полноценную жизнь.

РГ: Как проходит лечение?

Намазова-Баранова: Терапия муковисцидоза комплексная. Больному постоянно, в течение всей жизни нужны лекарства. Им необходимы муколитики — вещества, разрушающие слизь и помогающие ее отделению. Чтобы расти, прибавлять в весе и развиваться по возрасту, больной с каждым приемом пищи должен получать ферментные препараты. Ему почти постоянно необходимы антибиотики для купирования или профилактики обострения. В случае поражения печени нужны гепатопротекторы — препараты, разжижающие желчь и улучшающие функцию печеночных клеток. Для введения многих препаратов нужны ингаляторы. Необходима кинезитерапия — дыхательная гимнастика и специальные упражнения, направленные на удаление мокроты. Занятия должны быть ежедневными, пожизненными.

РГ: Где лучше лечить таких больных: дома, в стационаре?

Намазова-Баранова: И дома, и амбулаторно, и в стационаре! В идеале должна быть создана преемственная система, как у нас в центре, когда пациент имеет возможность получать медицинскую помощь и в дневных, и в стационарных условиях. Конечно, таким детишкам часто требуется госпитализация в круглосуточный стационар, но можно проводить лечение и дома, особенно если заболевание в легкой форме. Многое зависит от умения, терпения родителей. Но нужна постоянная связь с лечащим врачом. Даже для проведения ежедневной дыхательной гимнастики требуется совет знающего специалиста.

РГ: Уровень лечения муковисцидоза — показатель развития национальной медицины. В США и европейских странах средний срок жизни таких больных — 35-40 лет жизни. В России -всего 20-29 лет. Почему?

Намазова-Баранова: Методики лечения на Западе и в России основаны на одних и тех же принципах. Но если в развитых странах вопрос с пожизненной помощью таким пациентам решен на государственном уровне, то в России проблема помощи детям с редкими болезнями разрешена лишь частично. Стоимость поддерживающей терапии для больного муковисцидозом — от 10 000 до 25 000 долларов в год. Большинство местных бюджетов не в состоянии оплатить нужные препараты и оборудование. Достойно обеспечиваются всем необходимым такие больные, как правило, только в столицах, и то только дети… Кроме того, некоторые лекарства в России сложно достать. Например, ингаляционные антибиотики не производятся в стране, а потому не все регионы могут обеспечить ими больных. Дети не получают должного лечения и в результате живут в два раза меньше зарубежных сверстников. Со взрослыми пациентами ситуация еще сложнее.

Обнадеживает 44-я статья нового закона Минздравсоцразвития России «Об основах охраны здоровья граждан в РФ», а также такие благотворительные программы поддержки больных муковисцидозом, как программа «Я дышу!». Это пример конкретных действий в помощь тем, кто страдает неизлечимым недугом. Неизлечимым, но таким, с которым можно жить долго и без мучений. Очень важна поддержка фондов, работающих с больными детьми. Фонды, созданные родителями детей, страдающих муковисцидозом, и программа «Кислород» благотворительного фонда «Тепло сердец», программы фонда «Острова» — не только моральная поддержка, но и возможность полноценного лечения, и даже стимул заниматься творчеством!

Почему педиатры вовремя не диагностируют редкие заболевания — Российская газета

Многие редкие заболевания, которые также называют орфанными, начинают проявляться еще в детстве. Но нередко педиатры не диагностируют их вовремя. Почему это происходит, «РГ» рассказала заместитель директора Научного центра здоровья детей Минздрава России, профессор Лейла Намазова-Баранова.

Лейла Сеймуровна, орфанные заболевания стали одной из тем недавнего Конгресса педиатров России. Почему?

Лейла Намазова-Баранова: К сожалению, немногие орфанные болезни дают распознать себя внутриутробно или сразу после рождения. Как правило, поначалу ребенок с патологией не отличается от здоровых сверстников. Поэтому так важно вести работу среди педиатров, и особенно в первичном звене. Именно там должна возникать настороженность — внимание к симптомам, за которыми может скрываться тяжелое заболевание. У многих детишек диагноз, что называется, налицо. Тот, кто сталкивается с такими больными, видит их буквально от двери. У нас был такой случай, когда врач-отоларинголог с порога спросил вошедшую семью: вы из нашего отделения для «редких» детишек? Родители удивились, потому что их прислали из известной федеральной клиники, где лечили от лор-патологии. А на самом деле она оказалась следствием редкого заболевания, но там врачи долгих четыре года не видели, что их пациент не похож на других.

Какой, на ваш взгляд, должна быть подготовка педиатров, чтобы они умели распознавать редкие заболевания?

Лейла Намазова-Баранова: Уверена, что эти знания необходимо давать в медвузе. Скажем, с пятого курса, когда студенты изучают дифференциальную диагностику, позволяющую при схожих симптомах отличать одну болезнь от другой. Потом можно продолжать обучение в ординатуре, интернатуре. Но базовые знания очень важны, поскольку врачи-педиатры первичного звена становятся первыми, кто сталкивается с редкими детишками. Да, орфанные болезни — это небольшая часть педиатрии. Но статистика показывает не все. Население в нашей стране большое, и малое число пациентов связано, скорее всего, не с тем, что таких болезней нет, а с тем, что их просто не выявили. Тем более что еще недавно возможности по их диагностике, генетическому подтверждению были ограничены.

Ваш центр одним из первых стал создавать клинические протоколы по редким заболеваниям.

Лейла Намазова-Баранова: Мы обосновали необходимость мультидисциплинарного подхода к таким пациентам и начали создавать свои протоколы лечения. Эти болезни затрагивают весь организм — часто страдают и нервная система, и сердце, и почки, и кожа, и глаза… Ребенок нуждается в пристальном внимании со стороны разных специалистов. Мультидисциплинарный подход показал высокую эффективность. При многих заболеваниях дети еженедельно получают многочасовые инфузии. Понятно, что ребенок страдает, поэтому врачи привлекают дополнительно возможности — физиотерапию, массаж, оказывают психологическую помощь ему и семье. Наши организационные технологии вызывали большой интерес и в международном медицинском сообществе.

Центр занимается генетическими исследованиями?

Лейла Намазова-Баранова: У нас работает генетическая служба, разработаны собственные методики. В частности, удалось обнаружить новые мутации. Выяснилось, что часты случаи, когда сами родители больного ребенка не являются носителями патологического гена. По заданию минздрава было проведено пилотное обследование детей из детских домов, которое показало, что среди них процент страдающих редкими болезнями выше. Мы также реализовали программы селективного скрининга групп пациентов, в которых вероятность орфанных заболеваний выше, и доказали его эффективность. Например, одной из таких групп являются пациенты, которые находятся на гемодиализе. Но выявлять орфанные заболевания можно и вне таких групп. Скажем, когда ребенок вроде бы здоров, но у него затянувшаяся желтуха или частые простуды, хотя он находится на грудном вскармливании, что должно защищать от заболеваний. Такие звоночки должны насторожить и родителей, и педиатра.

В Европе для помощи редким больным создана общая для всех стран информационная база данных. Необходимо ли что-то подобное создать у нас?

Лейла Намазова-Баранова: У нас иная система здравоохранения, и по части организации лучшая в мире. Ведь в Европе за ребенком наблюдают взрослые врачи, а у нас есть педиатрическая служба, которая целенаправленно занимается здоровьем детей. Имеются и современные электронные базы данных. Конечно, в 90-х и нулевых годах были трудности, которые не позволяли качественно обследовать детишек. Если восполнить эту брешь, насытить первичное звено технологиями, позволяющими выявлять редкие болезни, то банк данных пополнится моментально. Необходимо совершенствовать и регистры больных. Сегодня они представляют собой скорее реестры — там содержится информация о больных и получаемых ими препаратах. А нужны более обширные данные. И с учетом того, как быстро развивается в нашей стране информатизация, все это реально осуществить.

Что сегодня больше мешает успешному выявлению и лечению редких болезней — нехватка финансирования, дороговизна лекарств, недостаточная подготовка кадров?

Лейла Намазова-Баранова: На первое место я бы поставила подготовку врачей и повышение информированности общества. А финансовые вопросы — на второе. Они решены не полностью. Если в Москве больные получают адекватное лечение, то во многих регионах с этим есть проблемы.

Многие считают, что финансирование госзакупок лекарств для орфанных больных нужно вернуть на федеральный уровень.

Лейла Намазова-Баранова: Раньше так и было, и я согласна, что финансирование должно быть централизованным. В основном препараты для этих заболеваний импортные. Конечно, хотелось бы иметь отечественные. Но нужно посчитать экономическую целесообразность этого.

11-летняя девочка вдохновляла игроков «Сент-Луиса». Она борется с тяжелой болезнью

Очень эмоциональная история.

Во время празднования победы «Сент-Луиса» в Кубке Стэнли на лёд пригласили Лейлу Андерсон. 11-летняя девочка вышла на лёд со своей мамой, прикоснулась к трофею и поцеловала его. Пока ее любимые хоккеисты бились за кубок, она боролась со страшной болезнью. Сейчас её состояние улучшилось. У Лейлы гемофагоцитарный лимфогистиоцитоз (ГЛГ) – необычайно редкое и опасное для жизни иммунное заболевание. 

Stanley, meet Laila. #StanleyCup pic.twitter.com/TScL24otTC
— NHL (@NHL) 13 июня 2019 г.

А еще девочка с раннего детства болеет за «Сент-Луис». Она попросила врача разрешить ей посмотреть третью игру команды в финале Западной конференции. После игры Лейла сказала журналистам, что игра команды вдохновляет её. Хоккеисты «Сент-Луиса» также вдохновлялись сильной и стойкой девочкой, назвав ее талисманом команды.

Лейла Андерсон и Колтон Парайко / фото: Patrick Smith, Getty Images

Защитник «Сент-Луиса» Колтон Парайко познакомился с Лейлой во время Хэллоуина в прошлом году, он пришёл в детскую клинику. По его словам, они сразу же подружились. Игрок обещал девочке, что команда добьется успеха ради неё. А в это было трудно поверить в январе, когда «Сент-Луис» занимал последнее место в конференции.

Парайко переписывался с Лейлой весь сезон и поддерживал её в трудные минуты. Когда она проходила биопсию мозга, защитник обещал, что посвятит ей свою следующую игру. Тогда он рассказал о своей подруге партнёрам по команде, после чего о Лейле начали говорить все в клубе.

«Она очень хороша, настоящий пример для всех нас. Ее стремление и упорство достойны похвалы», – сказал Парайко. Лейла тоже очень ценит поддержку игрока, он стал для неё лучшим хоккеистом в мире.

В январе Лейле пересадили костный мозг, и врачи запретили ей выходить из дома во время длительной реабилитации. Четыре месяца девочка не могла прийти на арену и поддержать свою команду. Когда реабилитация закончилась, её мама первым же делом повела Лейлу на хоккей. Вам лучше самим увидеть эмоции ребёнка.

После матча с «Сан-Хосе» она общалась с игроками. Это выглядело очень мило. Нападающий Пэт Марун назвал её нашим героем. 

Awesome moment: Pat Maroon meets with 11-year-old Laila Anderson after the Blues advanced to the Stanley Cup Final.

«You are our hero.» pic.twitter.com/ZijEbXpYtc
— Andrew Kauffman (@AndrewABC17) 22 мая 2019 г.

Во время финала Запада она даже успела «поработать» корреспондентом NBC и взять комментарии у игроков «Сент-Луиса».  

Hear from our guest correspondent Laila Anderson as she previews the #StanleyCup Final with the @StLouisBlues’s Alexander Steen!

Nice job, Laila! pic.twitter.com/BNKqFxIKIf
— NHL on NBC (@NHLonNBCSports) 22 мая 2019 г.

Сегодня, самым счастливым человеком на льду казался Парайко.

A bond that can’t be broken. 

Laila Anderson and Colton Parayko lift the #StanleyCup together. pic.twitter.com/wLBvmGuUwg
— Sportsnet (@Sportsnet) 13 июня 2019 г.

Лейле после матча вручили чемпионские футболку и кепку.

This is the best thing you’ll see tonight! 11-year-old Blues superfan Laila Anderson celebrating the Stanley Cup

(via @NHL)pic.twitter.com/mGq1Q8nYlB
— FanSided (@FanSided) 13 июня 2019 г.

Лейла говорит, что верила в команду, даже когда она находилась на последнем месте в турнирной таблице. Последний год что у девочки, что у команды, очень похожи – они пережили трудные моменты, но не сдавались и упорно боролись. Если «Сент-Луис» уже добился своей заветной цели, то Лейле до полного выздоровления предстоит долгий путь, но Колтон Парайко и его одноклубники уверены, что она справится.


Читайте также:

«Сент-Луис» выиграл Кубок Стэнли. Тарасенко провёл идеальный седьмой матч

Тарасенко всего 27, а он уже многодетный отец

Тарасенко – второй снайпер «Сент-Луиса» в Кубке Стэнли. Он много забивал из-за уникального броска

Тарасенко, Барбашёв и еще 30 российских обладателей Кубка Стэнли в одной картинке

Оценка текста

«Медицина – точная логическая наука»

Термин «орфанные заболевания» появился в лексиконе российских врачей сравнительно недавно, когда, благодаря современному медицинскому оборудованию, стали диагностировать редкие, смертельно опасные болезни, связанные с генетическими патологиями. Но на тернистом пути от диагностики до успешного лечения пациента врача ожидает немало проблем. О них и о том, как они решаются, мы говорим с председателем исполкома Союза педиатров России, президентом Европейской педиатрической ассоциации, заместителем директора по научной работе ФГАУ «Национальный медицинский исследовательский центр здоровья детей» Минздрава РФ – директором НИИ педиатрии, академиком РАН Лейлой Намазовой-Барановой.

 

 

– Лейла Сеймуровна, как складывается ситуация с диагностикой орфанных заболеваний в России?

 

– Ещё пару десятилетий назад врачи практически ничего о них не знали. Сейчас ситуация иная: нам известно о нескольких тысячах редких болезней, и список их постоянно растёт. В последней редакции федерального закона «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» понятие «орфанные заболевания» закреплено законодательно.

 

Сегодня эта тема активно обсуждается как медицинским сообществом, так и СМИ, но до сих пор нет единого мнения о том, какое заболевание считать орфанным. В понимании медиков это, прежде всего, генетические патологии, которые обнаруживаются либо при рождении, либо в первые годы жизни пациента.

 

Диагностика подобных болезней, прежде всего, подразумевает исследование генома. В простых ситуациях заболевание выявляется по мутациям или изменениям в структурах хромосом, но более сложные случаи требуют серьёзного обследования с использованием высоких генетических технологий. И тут возникают проблемы. На основании только клинических проявлений некоторые орфанные заболевания диагностировать можно, но диагноз всё-таки должен быть подтвержден генетически. Однако далеко не во всех регионах есть необходимое медицинское оборудование, поэтому не все пациенты-орфанники в итоге получают правильное лечение.

 

Многие специалисты предлагают расширить неонатальный скрининг, чтобы выявлять детей, страдающих орфанными заболеваниями, как можно раньше. Ранняя диагностика позволяет предотвращать развитие серьезных нарушений функционирования отдельных органов и систем, наступающих в результате «генетических поломок». Для того чтобы её провести, должны быть соответствующие методики и технологии. У нас они есть. Так, несколько лет назад по заданию Министерства здравоохранения мы в Научном центре здоровья детей разработали чип для определения 28 орфанных болезней (в то время именно для такого количества заболеваний существовала патогенетическая терапия).

 

– Верно ли, что именно в Национальном медицинском исследовательском центре здоровья детей Минздрава РФ был впервые в России диагностирован ДЛКЛ – дефицит лизосомной кислой липазы?

 

– Да, в январе 2000 г. у годовалой девочки С. обнаружили это генетическое, прогрессирующее метаболическое заболевание. У пациентов, страдающих ДЛКЛ, наблюдается постоянное неконтролируемое накопление эфиров холестерина и триглицеридов в лизосомах. В результате, лизосомы переполняют клетки, это приводит к полиорганным нарушениям. Несвоевременная диагностика ДЛКЛ грозит тяжёлыми, непредсказуемыми осложнениями, вплоть до летального исхода.

 

Больная С. стала первой пациенткой с официально зарегистрированным диагнозом ДЛКЛ, но в те годы у нас не было препарата для лечения этой болезни. Лишь через 16 лет после установления диагноза, в апреле 2016 г., С. стала получать ферментную заместительную терапию. К сожалению, не удалось предотвратить цирроз печени, однако, на сегодняшний день состояние девушки стабильное. Она успешно учится в медицинском институте.

 

– Каковы симптомы ДЛКЛ и как они влияют на здоровье пациентов?

 

– Болезнь может поражать сразу несколько жизненно важных органов. По статистике осложнения, связанные с работой печени – наиболее частые и распространенные клинические симптомы ДЛКЛ. Они наблюдаются приблизительно у 86% пациентов и связаны с развивающимся фиброзом или циррозом печени.

 

ДЛКЛ приводит к повышению в крови пациента уровня холестерина и триглицеридов, что в свою очередь, выражается в развитии атеросклероза сосудов, который становится причиной ишемической болезни сердца, инфаркта миокарда и инсульта.

Также страдает селезёнка, она увеличивается в размерах и чрезмерно активна. Если ситуацию не удаётся нормализовать, возникает необходимость удаления органа.

 

Желудочно-кишечные проявления ДЛКЛ вызваны накоплением жировых субстратов в кишечнике. У младенцев наблюдается рвота, диарея, синдром мальабсорбции и задержка физического развития.

 

Всё перечисленное – лишь часть признаков болезни. ДЛКЛ поражает сразу несколько органов, поэтому комбинации симптомов могут быть самые разные. Это коварная болезнь, способная «маскироваться» под множество других заболеваний, поэтому врачи и ставят пациентам неверные диагнозы. Подобная неосведомлённость – главная сложность при диагностировании ДЛКЛ. Для успешного выявления болезни крайне необходим междисциплинарный подход с использованием современных лабораторных методов исследования. На сегодняшний день наиболее оптимальный способ диагноза ДЛКЛ – ферментативный анализ крови пациента.

 

– Какие последствия может вызвать неверная диагностика заболевания?

 

– Чем дольше болезнь остаётся без лечения, тем хуже состояние пациента и ближе фатальный исход. Но если диагноз установлен, и врачи используют специальный препарат, содержащий фермент, который не вырабатывает организм больного, мы можем стабилизировать его состояние. Это называется заместительной терапией.

 

– Как это произошло с пациенткой С.?

 

– Да. Вначале для лечения использовалась симптоматическая терапия: назначались препараты для стабилизации работы печени. Но, естественно, это были временные меры, поскольку, как я уже говорила, в то время ещё не существовало таргетного препарата.

 

– То есть, симптоматическая терапия проблему не решает?

 

– Конечно. Болезнь продолжает поражать печень либо другие органы, мы лишь чуть замедляем разрушительный процесс. Как доказывает практика, поддерживающая терапия для пациентов с ДЛКЛ (применение статинов, трансплантация печени и гемопоэтических стволовых клеток) недостаточно эффективна. Поэтому для успешного лечения необходимо использовать специальные препараты для ферментозаместительной терапии.

 

– Вы занимались лечением С., когда она была еще ребенком. Но дети растут, а болезнь не отступает. Как складывается судьба Ваших пациентов в дальнейшем? Есть ли сложности при переводе больных во «взрослую» амбулаторную сеть?

 

– Это, собственно, и есть сложность, причём, не только в России, но и у западных коллег. У нас, к счастью, пациентов наблюдают до 18 лет, а на Западе – уже в 6 – 8 лет больных должны передавать в ведение врачей общей практики. И это драматический момент: нужно продолжать системное ведение, а повзрослевшие пациенты вроде как никому не интересны. Во взрослых референсных центрах не хотят с ними заниматься, а детские врачи – уже не имеют права.

 

Такая же ситуация складывается и в нашей стране, когда пациентам исполняется 18 лет. Их семьи просят нас не оставлять повзрослевших детей, а мы пишем обращения в разные инстанции, чтобы на законных основаниях вести их хотя бы до 21 года. Ведь мы досконально изучили все проблемы своих подопечных за столько лет. А переход во «взрослую сеть» зачастую оказывается фатальным, поскольку преемственность, к сожалению, налажена лишь для небольшой части пациентов. «Взрослые» врачи не относятся к этим больным столь же бережно, как педиатры, поэтому быстро наступает трагический финал. Это серьёзная проблема, и чтобы решить её, необходимо тесное взаимодействие между детскими и взрослыми референсными центрами.

 

– Вы говорили, что врачи недостаточно информированы о ДЛКЛ, поэтому у них нет настороженности к этой болезни, как и ко многим другим орфанным заболеваниям. Как, на Ваш взгляд, необходимо формировать эту специфическую настороженность? Можно ли использовать европейский опыт?

 

– Очень непростой вопрос. И они, и мы пишем различные клинические рекомендации, но существует «дистанция огромного размера» между тем, что написано, и тем, что происходит на практике.

 

Например, европейские страны формируют для детей с орфанными заболеваниями межгосударственные референсные центры. В Висбадене, Германия, находится специализированный центр редких заболеваний, который возглавляет доктор Маурицио Скарпа, являющийся ведущим специалистом по генетическим заболеваниям в Европе, который имеет 56 филиалов в разных странах. Мы с ним активно сотрудничаем.

 

Аналогичную систему мы предлагаем использовать и в России. У нас ведь есть федеральный центр (ФГАУ «Национальный медицинский исследовательский центр здоровья детей» Минздрава РФ – прим. редактора), есть филиалы в каждом регионе. Эти филиалы, в свою очередь, являются своеобразными объединяющими центрами для своего региона: они выстраивают отношения с местными медицинскими учреждениями, дают консультации пациентам с редкими болезнями, предлагают возможности направления пациента в федеральный научный центр. Словом, мы ставим вопрос о необходимости создания системы, при которой верификация диагноза редкой болезни должна проходить в федеральном референсном центре, так же, как инициация терапии. А затем мы передаём пациентов в ведение региональных центров, где их специалисты продолжат лечение, периодически присылая информацию о состоянии пациента. Мне кажется, это абсолютно логичная система, благодаря которой можно решить многие проблемы.

 

– Другими словами, если врач ставит, по его мнению, верный диагноз, но лечение пациенту не помогает, он обязан проконсультироваться с другими специалистами?

 

– Это обязательное требование для такой ситуации. Если ты поставил диагноз, назначил необходимую терапию, но положительной динамики нет, необходимо сделать шаг назад и пересмотреть диагноз. Проблема заключается именно в том, что из-за недостаточной компетентности, профессиональных амбиций и массы других субъективных причин доктора не хотят советоваться с коллегами и признать свою ошибку.

Элементарная логика: если диагноз верен и назначена адекватная терапия – лечение помогает. В противном случае, нужно задуматься: что ты сделал неправильно? Может, больной говорит, что принимает лекарство, а на самом деле его игнорирует? Значит, ты не убедил его в своей правоте. Назначил не эффективный препарат – стало быть, не следуешь клиническим рекомендациям. Медицина – совершенно точная, логическая наука. Если бы мои коллеги лучше следовали клиническим рекомендациям, уверяю: ошибок и трудностей в практической медицине было бы намного меньше.

 

Любой врач должен руководствоваться, в первую очередь, логикой. Если клиническая рекомендация предписывает назначить пациенту препарат определённой группы, нельзя назначать другой лишь потому, что «я так вижу». Это недопустимо в современной медицине. Ты обязан назначить то, что положено по диагнозу, и лишь затем думать о сопутствующей патологии, коморбидностях и т.д. Но это уже другая тема.

 

– Судя по данным неофициальной статистики, у нас диагностирование ДЛКЛ весьма эффективно по сравнению с другими странами. В чём секрет успеха?

 

– Во-первых, мы располагаем адекватными методами диагностики, имея возможность подтверждать генетически этот диагноз. Во-вторых, достаточно много педиатров и гастроэнтерологов уже хорошо ориентируются в редких болезнях вообще и, в частности, в ДЛКЛ. И, наконец, у нас активно используется принцип мультидисциплинарности для таких случаев – ведение пациента несколькими специалистами. Именно это, на мой взгляд, позволяет достичь неплохих результатов, о которых вы только что сказали. Уже немалое число пациентов-орфанников диагностировано и лечится необходимыми препаратами. И это – самое большое наше достижение.

 

Источник: riaami.ru.

Страница не найдена |

Страница не найдена |



404. Страница не найдена

Архив за месяц

ПнВтСрЧтПтСбВс

22232425262728

       

       

     12

       

     12

       

      1

3031     

     12

       

15161718192021

       

25262728293031

       

    123

45678910

       

     12

17181920212223

31      

2728293031  

       

      1

       

   1234

567891011

       

     12

       

891011121314

       

11121314151617

       

28293031   

       

   1234

       

     12

       

  12345

6789101112

       

567891011

12131415161718

19202122232425

       

3456789

17181920212223

24252627282930

       

  12345

13141516171819

20212223242526

2728293031  

       

15161718192021

22232425262728

2930     

       

Архивы

Мар

Апр

Май

Июн

Июл

Авг

Сен

Окт

Ноя

Дек

Метки

Настройки
для слабовидящих

Команда КГМУ в РНИМУ им.

Н.И. Пирогова


Добрый день, поздравляю Вас с победой в столь значимой олимпиаде. Расскажите, где проходили соревнования?


Соревнования проходили на базе Учебного центра инновационных медицинских технологий РНИМУ им. Н.И. Пирогова, на новейшем современном оборудовании и тренажерах в учебных операционных. Олимпиада состоялась при поддержке Российского общества хирургов (РОХ) совместно с Обществом эндоскопических хирургов России, НПС «Эндохирургия» и УЦИМТ.


Кто входил в команду КГМУ?


Команду КГМУ представляли: ординатор кафедры хирургических болезней №2 Лейла Музабиловна Велиева, интерн кафедры детской хирургии Альфия Рустамовна Хабибулина, студентка 5 курса педиатрического факультета Регина Евгеньевна Серебрекова, студент 4 курса педиатрического факультета Булат Шамилевич Бикбов. Капитаном команды была Лейла Велиева.


Какие задания были?


Лейла: Было два конкурса эндоскопический и тренажерный.   Эндоскопический конкурс включал в себя лапароскопическую холедохолитотомию, удаление конкремента, дренирование и ушивание раны интракорпоральным швом и теоретическая подготовка участников. Главная задача традиционна минимум времени на задание. Так же был проведен конкурс капитанов команд, где необходимо было продемонстрировать хорошие теоретические знания и умение ориентироваться в эндовидеоизображениях.


Альфия: В тренажерном конкурсе одному участнику надо было герметично и качественно, в отведенное время  продемонстрировать свое умение в наложении интракорпорального непрерывного шва на стенку кишки, а другому — выполнить аппендэктомию с перевязкой культи экстракорпорально, также оценивалась теоретическая подготовка.


Лейла: По итогам всех конкурсов команда КГМУ заняла 2 общекомандное место. У нас былапрекрасная возможность продемонстрировать свои лучшие профессиональные навыки и мы ее использовали.


Как вы отбирали студентов для участия в конкурсе?


Лейла: я совмещаю практическую работу в отделении с преподаванием на кафедре хирургических болезней №2. Во время одного из  занятий заметила активнуюдевочку, которая  заинтересовалась возможностью принять участие в конкурсе в роли ассистента.


Альфия: со студентом, который выступал со мной в конкурсе, я познакомилась на производственной практике, он уже знал теоретические и практические основы эндохирургических вмешательств, что и послужило остановиться в этом выборе.


Ваши планы?


Лейла: Хотелось бы уже применять свои навыки на практике, не исключено, что будем участвовать в следующей олимпиаде, тем более у нас теперь есть такие хорошие преемники.


Как Вы успеваете совмещать учебу и подготовку к конкурсам?


Альфия: За две недели на период подготовки к олимпиаде нас освободили от практики. Каждый день мы занимались в эндоскопическом кабинете в центре высоких технологий РКБ и ходили на лапароскопические операции в отделение общей хирургии и гинекологии на базе 18 ГБ.    


Какие преподаватели готовили Вас?


Наш главный  руководитель — доцент кафедры хирургических болезней №1, к. м.н. Арсен Ирекович Курбангалеев, который в полном объеме теоретически и практически подготовил нас   к олимпиаде, а главное дал самые лучшие свои инструменты, которые были в арсенале  18 больницы. Также за предоставленные наборы инструментов благодарны Евгению Викторовичу Можанову (к.м.н., ассистент кафедры хирургических болезней №1), Джаухарие Мирхатиповне Миргасимовой (к.м.н., доцент кафедры хирургических болезней №1), Ринату Явветовичу Яфясову (доцент, к.м.н. кафедры детской хирургии), Фариту Вагизовичу Баширову (заведующий кафедры топографической анатомии и оперативной хирургии).


Огромная благодарность Мухарямовой Ляйсан Музиповне, которая поверила в нас и командировала нас для участия в конкурсе и генеральному директору образовательного центра высоких медицинских технологий РКБ Леониду Иосифовичу Галинскому.


Спасибо, успехов вам.

Врач допустила проблемы с фертильностью у переболевших в детстве COVID :: Общество :: РБК

Представитель Союза педиатров добавила, что необходимо обязательное наблюдение за детьми, которые переболели инфекцией.

В начале октября ученые Принстонского университета, Университета Джонса Хопкинса и Калифорнийского университета выяснили, что в распространении коронавируса во всем мире большую роль сыграли дети и молодежь, которые составляют лишь малый процент среди заразившихся.

Читайте на РБК Pro

Ученые проанализировали 85 тыс. случаев заражения COVID-19 среди 575 тыс. человек в двух штатах на юго-востоке Индии. Согласно результатам исследования, 71% заболевших никого не заразили, в то время как 8% — вызвали 60% новых случаев заражения. Исследователи пришли к выводу, что основными распространителями коронавируса являются дети и молодые люди, на долю которых приходится треть рассмотренных случаев COVID-19.

Глава Минздрава ответил на сообщения о связи коронавируса и бесплодия

В свою очередь, директор НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера Роспотребнадзора, академик РАН Арег Тотолян заявил, что предположение о том, что школьники — это активные разносчики коронавируса, не подтвердилось. По его словам, в одной из скандинавских стран было проведено исследование, которое показало, что не дети заражают пожилых, а, наоборот, пожилые — детей.

По данным Роспотребнадзора, за первое полугодие в России коронавирусом переболели около 50 тыс. детей. В ведомстве отмечали, что у трети из них не было никаких симптомов заболевания, а в тяжелой форме COVID-19 перенесли только 0,2%.

Как меняется число новых случаев заражения Covid-19 в России

Источник: федеральный и региональные оперштабы по борьбе с коронавирусом

Данные по России i

Звезда «Великой армии» Амалия Ю о том, почему история Лейлы важна для подростков

Амалия Ю не хочет судить персонажей, которых она играет, независимо от их выбора. Но пока она смотрела эпизоды Grand Army , нового шоу Netflix, в котором она играет первокурсницу по имени Лейла Кван Циммер, она поймала себя на том, что реагирует на выбор своего экранного коллеги. «Я подумал:« Черт возьми, она довольно сумасшедшая, я не знаю, стал бы я так поступать », — признается 18-летняя девушка Teen Vogue .

Реакция была бы оправданной: в 9-серийном первом сезоне Grand Army Лейла пытается замаскировать свою излучаемую неуверенность, срывая свой путь через решения, которые она, возможно, только наполовину обдумала. Имея несколько друзей в ее средней школе в Бруклине, она постоянно борется за внимание одноклассников, особенно популярных членов команды по плаванию. Шоу следует за ней и четырьмя другими учениками, поскольку их жизни пересекаются в классах, коридорах и в социальных сетях — и для Лейлы большая часть времени тратится на попытки определить себя в связи со своими одноклассниками или противопоставить их.

Неуверенность Лейлы усиливается тем фактом, что она редко чувствует себя принятой людьми, которые, по ее мнению, должны принять ее такой, какая она есть, без вопросов. Другие китайско-американские девочки в ее классе критикуют ее за то, что она недостаточно «китаянка», потому что в детстве она была усыновлена ​​белыми родителями, и она и ее лучшая подруга Рэйчел (Лола Блэкман) начинают расходиться, когда Лейла превращает каждый разговор в возможность разбирать текстовые сообщения от популярного Джорджа (Энтони Ипполито). Даже хладнокровный раввин-феминист, к которому она обращается за советом, предполагает, что ей, возможно, следует обратиться к терапевту, и Лейла считает это еще одним доказательством разрыва между ней и ее иудаизмом.

Для Амалии, давней ученицы создателя шоу Кэти Каппиелло, усугубляющаяся неуверенность Лейлы в себе казалась универсальной и была одной из причин, по которой ее тянуло к персонажу. «Я думаю, что у многих людей бывают моменты, когда независимо от того, сколько вам лет, независимо от того, где вы находитесь в своей жизни, вы чувствуете себя Лейлой, чувствуете себя неуверенно и постоянно сравниваете себя с другими», — говорит она.«Вы чувствуете себя на 10 шагов позади всех и не знаете, как их догнать. У меня бывают моменты, когда я так себя чувствую. И я полностью так себя чувствовал, когда был первокурсником в старшей школе ».

Она добавляет, что ей «действительно повезло, что на меня никогда не оказывали давление со стороны моих родителей, друзей или сообщества», чтобы я предпочел одну часть ее пересекающихся идентичностей остальным, но Амалия признает, что это «определенно то, что Лейла чувствует, что должна это сделать… Она чувствует себя такой потерянной, и ей кажется, что все вокруг нее рушится, поэтому она так сильно пытается за что-то ухватиться. Она чувствует, что ее религия или ее расовая принадлежность могут быть одной из тех вещей, за которые нужно ухватиться, и поэтому она пытается представить себя китайцем или евреем ». В подтексте борьбы Лейлы кроется невысказанная возможность: почему она должна выбирать, особенно учитывая, что одна идентичность не отрицает другую? Почему она не может быть и китаянкой, и еврейкой, и кем еще она хочет быть?

Тиккун Лейл Шавуот — Конгрегация Агудас Ахим

Теперь доступны видео всех живых сессий. Прокрутите вниз до полных описаний классов, чтобы получить доступ к отдельным ссылкам на видео или просмотреть их все здесь.

В беспрецедентное время мы объединяемся в сообщество, чтобы возобновить нашу приверженность себе и своей вере. Всех приветствую.

Мы рады присоединиться к нашим местным партнерам Храм Бет Шалом, Конгрегации Бет Исраэль и Шалом Остин, а также Адат Йешурун (Миннетонка, Миннесота) и Раввинской Ассамблее, чтобы подарить вам увлекательный вечер обучения.

Присоединяйтесь к нашим партнерам в Adath Jeshurun ​​на их миньяне в 17:00, а затем совместное пение Книги Руфи в 17:30 с помощью Zoom.

Точно так же, как наши предки праздновали новый рассвет, получив Тору, мы с нетерпением ждем начала нового завтра друг с другом.

Нашим основным докладчиком является Д-р Джереми Сури , заслуженный председатель кафедры лидерства в мировых делах Мак Брауна Техасского университета в Остине.

Классы будут представлены по 4 трекам: Mind , Body , Spirit и Sinai . Мы надеемся, что эти темы вдохновят на множество возможностей духовного и научного обучения. Мы рады учиться у наших местных раввинов, уважаемых членов общины и почетных гостей.

В полночь мы все объединимся в один финальный концерт кулану с раввином Нилом Ф. Блюмофе (CAA).


ИНТЕРАКТИВНОЕ РАСПИСАНИЕ

Щелкните поля с цветовой кодировкой, чтобы присоединиться к комнате Zoom для желаемого класса.

Все сеансы одного цвета / дорожки находятся в одной комнате Zoom. Прокрутите вниз, чтобы увидеть полную информацию о классе. Пароль для всех сеансов — «шавуот», хотя вводить его не обязательно.

Технические трудности? Электронная почта [email protected] или [email protected]


ПОЛНОЕ ОПИСАНИЕ КЛАССА

19:30

Приветственное слово

8:00 — 20:50

Основной докладчик: Джереми Сури (видео)

Что означает гражданское обновление сегодня?

Из поколения в поколение евреи играли решающую роль в восстановлении институтов и связей между людьми после трагедии.Как мы понимаем уникальный исторический вклад евреев в гражданское обновление? Как мы можем сделать аналогичный вклад сегодня? Эта презентация будет использовать историю, чтобы помочь нам подумать об уроках, наследии и текущих возможностях.

9:00 — 21:50

РАЗУМ: раввин Гейл Сведро (Конгрегация Агудас Ахим) (Видео)

Путешествие Руфи

Посредством оригинального текста, современного мидраша (комментария) и, возможно, даже создания нашего собственного художественного мидраша, исследуйте, как Рут изменила свою жизнь, сделав ряд смелых решений, и как риск, маленький или большой, может привести к положительным преобразованиям в вашей собственная жизнь.

ТЕЛО: Элисон Альтер, член совета Остина, округ 10 (видео)

Тиккун Олам через выборный офис / государственную службу

Что значит следовать Тиккун Олам через выборную должность или другую государственную службу? Как добиться успеха в «Тиккун Олам» в контексте гиперпартийности, круглосуточного цикла новостей и нашей новой виртуальной реальности COVID-19?

ДУХ: Раввин Эми Коэн (Храм Бет Шалом) (Видео)

Лидерство во время кризиса: еврейские женщины, нашедшие силу и радость в трудные времена

Мидраш учит нас, что Мириам унесла с собой веру, когда покинула Египет.Рут изменила свою жизнь (и будущее еврейской общины), рискнув и сделав смелый выбор. На протяжении веков еврейские женщины находили силы и радость в самые трудные времена своей жизни. Читая их истории и изучая мидраш, древние и современные комментарии, мы будем чтить их наследие, вдохновляясь нашими библейскими предками женского пола

SINAI: Раввин Даниэль Септимус (Шалом Остин) (Видео)

Пастух: Авраам Джошуа Хешель и эффективность молитвы

Сейчас, когда мы сталкиваемся с неуверенными и трудными временами, учение раввина Авраама Джошуа Хешеля о действенности молитвы дает ценное понимание и руководство. Мы погрузимся в его взгляды на то, как молитва позволяет нам соединиться с Б-гом, как это делали наши предки несколько поколений назад на горе Синай.

10:00 — 22:50

MIND: Hazan Joanna Dulkin (Adath Jeshurun) (Видео)

Сестры души: феминистка Бейт Мидраш

Руфь, Ноеминь, Семья Избранных и Хесед. Изучение женщин Шавуота через призму библейского текста, а также раввинских и современных мидрашей.

ТЕЛО: доктор Дэвид Голдблатт (видео)

Реагирование на тяжелые заболевания в Змон ха-Магефа (во время чумы).

Это основано на опыте моей семьи с моим братом Берни, который страдал от Covid19 и находился в отделении интенсивной терапии в течение последних 3 недель. Каждый вечер мы собирались всей семьей на Zoom, чтобы петь, молиться, рассказывать истории и молиться. Мы также отправились в воображаемое путешествие силы и исцеления.

ДУХ: Раввин Гарольд Кравиц (Адат Йешурун) (Видео)

Встреча с Мусаром — включение Синая в нашу жизнь.

Движение муссар было разработано раввином Исраэлем Салантером в XIX веке как способ побудить людей по-настоящему жить ценностями, принятыми на Синае. Раввин Гарольд Кравиц из Адат Йешурун Конг предлагает эту возможность погрузиться в эту обновленную духовную практику.

SINAI: Раввин Монти Элиасов (Конгрегация Шалом Рав) (Видео)

Пурим — самый важный еврейский праздник? Исследование в книге «Бедствие, перемещение и искупление».

Раввин Монти Элиасов исследует реальность того, что Мегилла Есфирь (т.е. Скрытое Женское начало) вообще не включает Святое Имя, хотя, безусловно, включает в себя многочисленные отсылки к древним языческим именам богов! Плюс он размышляет, почему Пурим может не только оттолкнуть Пасху, Праздник Свободы, но и пошутить, что даже Йом Кипурим (День искупления) — это просто Йом К’Пурим (, т.е. отражение Дня Пурима) !!

11:00 — 23:50

MIND: Яира Робинсон (видео)

Посторонняя поэзия и еврейские ценности

Руфь была абсолютным аутсайдером, но от нее мы многое узнаем о еврейских ценностях. В ее честь мы будем читать и обсуждать стихи, написанные людьми, которые в некотором роде были / являются посторонними, и мы установим связи с еврейскими ценностями. Чему мы можем научиться сегодня, слушая голоса посторонних? Приглашаем участников принести стихотворение «постороннего», чтобы поделиться им!

ТЕЛО: Доктор Хили Смит (видео)

Микробиом — разум, тело и дух.

В этом шиуре мы рассмотрим разум, тело и дух через призму человеческого микробиома (совокупность бактерий, вирусов и других микроорганизмов, которые живут в нас и на нас и фактически являются неотъемлемой частью того, кем мы являемся. и как мы работаем).Мы будем переплетать науку, медицину, психологию и еврейские тексты, исследуя, кто мы, из чего мы сделаны и как это влияет на наш путь к здоровой, жизнеспособной и осмысленной жизни.

SPIRIT: Кэти Шехтер (видео)

Король, перепись и чума

В этом классе будут изучены традиционные еврейские истории и мудрость о том, что делать и как выжить во времена чумы. Утешающая древняя мудрость актуальна и в наше время.

СИНАЙ: Раввин Аарон Вейнингер (Адат Йешурун) (Видео)

И вообще, чья это Тора?

Присоединяйтесь к нам, когда мы исследуем провокационные раввинские тексты, от Маймонида до Мидраша, которые поднимают такой вопрос, когда евреи по всему миру (и Zoom) празднуют откровение Торы в Шавуот. Получим ли мы все место у подножия горы Синай, или богатства Торы принадлежат немногим избранным?

12:00 — 12:50

Основной докладчик: Раввин Нил Ф.Блюмофе (Конгрегация Агудас Ахим) (видео)

Арфа звучит в полночь: ночное наслаждение и вкус будущего мира

«Зоар», основополагающий труд еврейской мистической мысли, говорит о мудрых сердцем, которые входят и выходят во тьму и которые превращают тьму в свет. Как мы просыпаемся в этот поздний час? Присоединяйтесь к этому времени, чтобы получить мелодию, вдохновение и способы преуспевать, поскольку мы узнаем, как наши духовные предки процветали, трансформируя и повышая свое сознание.


Щелкните здесь, чтобы просмотреть предварительно записанные видеосеансы от местных учителей.


В это время, пожалуйста, рассмотрите возможность инвестирования в Support CAA во время Covid-19 Fund

Нравится:

Нравится Загрузка …

Аудиокнига недоступна | Audible.com

  • Evvie Drake: стартовала более

  • Роман

  • К:
    Линда Холмс

  • Рассказал:
    Джулия Уилан, Линда Холмс

  • Продолжительность: 9 часов 6 минут

  • Несокращенный

В сонном приморском городке в штате Мэн недавно овдовевшая Эвелет «Эвви» Дрейк редко покидает свой большой, мучительно пустой дом почти через год после гибели ее мужа в автокатастрофе. Все в городе, даже ее лучший друг Энди, думают, что горе держит ее внутри, а Эвви не поправляет их. Тем временем в Нью-Йорке Дин Тенни, бывший питчер Высшей лиги и лучший друг детства Энди, борется с тем, что несчастные спортсмены, живущие в своих худших кошмарах, называют «ура»: он больше не может бросать прямо, и, что еще хуже, он не может понять почему.

  • 3 из 5 звезд

  • Что-то заставляло меня слушать….

  • К

    Каролина Девушка
    на
    10-12-19

Аудиокнига недоступна | Audible.

com

  • Evvie Drake: стартовала более

  • Роман

  • К:
    Линда Холмс

  • Рассказал:
    Джулия Уилан, Линда Холмс

  • Продолжительность: 9 часов 6 минут

  • Несокращенный

В сонном приморском городке в штате Мэн недавно овдовевшая Эвелет «Эвви» Дрейк редко покидает свой большой, мучительно пустой дом почти через год после гибели ее мужа в автокатастрофе. Все в городе, даже ее лучший друг Энди, думают, что горе держит ее внутри, а Эвви не поправляет их. Тем временем в Нью-Йорке Дин Тенни, бывший питчер Высшей лиги и лучший друг детства Энди, борется с тем, что несчастные спортсмены, живущие в своих худших кошмарах, называют «ура»: он больше не может бросать прямо, и, что еще хуже, он не может понять почему.

  • 3 из 5 звезд

  • Что-то заставляло меня слушать….

  • К

    Каролина Девушка
    на
    10-12-19

Лейл Лаундес — Литературный менеджмент Джилл Гринберг

Что это за волшебное качество делает некоторых людей мгновенно любимыми и уважаемыми? Каждый хочет быть своим другом (или, если он одинок, любовником!). В бизнесе они стремительно поднимаются на вершину корпоративной лестницы.Что это за «прикосновение Мидаса»?

Все сводится к более умелому способу общения с людьми.

Автор посвятила свою карьеру обучению людей тому, как общаться для достижения успеха. В своей книге « Как разговаривать с кем угодно», («Современные книги», октябрь 2003 г.) Лаундс предлагает 92 простых и эффективных метода уверенного успеха, она проводит читателя от первой встречи до сложных техник, используемых крупными победителями в жизни. В этой информационной книге вы найдете:

9 способов произвести первое впечатление динамитом

14 способов научиться вести светскую беседу, «большой разговор» и язык тела

14 способов ходить и разговаривать как VIP или знаменитости

6 способов показаться инсайдером в любой толпе

7 способов установить глубокий подсознательный контакт с кем угодно

9 способов накормить чье-то эго (и знать, когда этого нельзя делать!)

11 способов сделать ваш телефон мощным средством связи

15 способов работать в партии, как политик работает в комнате

7 способов поговорить с тиграми и не быть съеденным заживо

В своем фирменном развлекательном и прямолинейном стиле стрельбы Лейл дает этим техникам броские названия, чтобы вы запомнили их, когда они действительно понадобятся, в том числе: «Подкрепи комнату», «Будь подражателем», «Подойди сюда, руки», «Голая». Их горячая кнопка »,« Великая карта показателей в небе »и« Сыграйте в игру с надгробиями »- для большого успеха в вашей общественной жизни, романтических отношениях и бизнесе.


Похвала Как разговаривать с кем угодно

«Вы не только сломаете лед, но и растопите его с помощью своих новых навыков». — Ларри Кинг

«Утерянное искусство вербального общения может быть восстановлено Лейлом Лаундесом». — Харви Маккей, автор книги Как плавать с акулами, не будучи съеденным заживо

Стимуляция FGF сигнального каскада Erk1 / 2 запускает переход плюрипотентных эмбриональных стволовых клеток от самообновления к клональному обязательству

Резюме

Плюрипотентные эмбриональные стволовые (ES) клетки должны выбирать между альтернативными судьбами
саморепликации и приверженности к линии при непрерывном размножении.Здесь мы очерчиваем роль аутокринной продукции роста фибробластов.
фактор 4 (Fgf4) и связанная активация передачи сигналов Erk1 / 2 (Mapk3 / 1)
каскад. Fgf4 является основным стимулом, активирующим Erk в ES-клетках мыши.
Вмешательство в активность FGF или Erk с использованием химических ингибиторов или генетических
абляция не препятствует размножению недифференцированных ES-клеток. Вместо,
такие манипуляции ограничивают способность ES-клеток совершать
дифференциация. ES-клетки, лишенные Fgf4 или обработанные ингибиторами рецептора FGF
сопротивляются нервной и мезодермальной индукции и невосприимчивы к BMP-индуцированным
ненейронная дифференциация.Потенциал привязки к линии Fgf4 -null
клетки восстанавливаются за счет предоставления белка FGF. Таким образом, FGF позволяет, а не
противодействует дифференцировочной активности BMP. Ключевая вторичная роль
Передача сигналов Erk выявляется при исследовании Erk2- нулевых ES-клеток,
которые не претерпевают нейральной или мезодермальной дифференцировки у приверженцев
культуре и сохраняют экспрессию маркеров плюрипотентности Oct4, Nanog и Rex1.
Эти результаты показывают, что стимуляция Fgf4 Erk1 / 2 является аутоиндуктивной
стимул для выхода наивных ES-клеток из программы самообновления.Мы
предполагаем, что каскад Erk направляет переход в состояние, которое реагирует
индуктивным сигналам сегрегации зародышевого листка. Рассмотрение сигнализации Эрк
в качестве основного триггера, который усиливает приверженность к родовой линии, обеспечивает контекст
для согласования разрозненных взглядов на вклад путей FGF и BMP
во время спецификации зародышевого листка у эмбрионов позвоночных.

ВВЕДЕНИЕ

Эмбриональные стволовые (ES) клетки представляют собой бессмертные клеточные линии, происходящие из эпибласта.
бластоцист млекопитающих (Брук и
Гарднер, 1997; Эванс и
Кауфман, 1981; Мартин,
1981).ES-клетки обладают способностью дифференцироваться на несколько
типы клеток, представляющие три дефинитивных зародышевых листка эмбриона, a
свойство, определяемое как плюрипотентность. В процессе самообновления ES-клетки
поддерживать эту силу при расширении культуры
(Смит, 2001b). Эти
свойства делают ES-клетки уникальной системой для изучения развития
решения и дифференциация (Kouskoff et al.
др., 2005; Нисикава и др.,
1998; Нива и др.,
2005; Смит,
2001a; Тада и др.,
2005), а также перспективный инструмент для биотехнологических и
биомедицинские приложения (Келлер,
2005).

Хотя требования для поддержания мышиных ES-клеток в самообновляющемся состоянии
плюрипотентное состояние все чаще определяется
(Чемберс и Смит, 2004;
Иванова и др., 2006),
остается процесс, с помощью которого ES-клетки первоначально вступают в предопределение
затемнять. Факторы роста фибробластов (FGF) и последующая активация
Сигнальный каскад Ras-Erk является критическим стимулом для пролиферации и
дифференцировка во многих типах клеток (Roux
и Бленис, 2004 г .; Thisse и
Thisse, 2005).Fgf4 производится автокринным способом
недифференцированные ES-клетки (Ma et al.,
1992; Ратьен и др.,
1999). Однако предыдущие исследования показали, что Fgf4 и Erk
активация может быть необязательной для размножения недифференцированных мышиных ES
клетки (Burdon et al. , 2002;
Burdon et al., 1999;
Жирманова и др., 2002;
Цюй и Фэн, 1998;
Wilder et al., 1997). Мы тут
очертить роль Fgf4 и сигнального каскада Ras-Erk в принятии решения
между самообновлением и приверженностью.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Линии и культура клеток ES

E14Tg2a и 46C родительских линий ES-клеток мыши были описаны ранее.
(Инь и др., 2003b).
Fgf4 +/- (клон 342) и Fgf4 — / — (клон
FD6) ES клетки были любезным подарком от Энджи Риццино.
(Wilder et al., 1997).
Erk2 +/- ES-клеток были получены путем нацеливания и двух
Erk2 — / — Клеточные линии ES (B1 и B3) были получены из
бластоцисты из Erk2 +/- перекрестков
(Saba-El-Leil et al., 2003).
Все линии ES-клеток поддерживали в GMEM (Sigma, G5154) с добавлением 10%
FCS (Invitrogen), 100 мкМ 2-меркаптоэтанол (BDH, 441413), 1 × MEM
заменимые аминокислоты (Invitrogen, 1140-036), 2 мМ l-глутамин,
1 мМ пируват натрия (оба от Invitrogen) и 100 единиц / мл LIF (произведено
внутри компании) на желатинизированных колбах для культур тканей
(Смит, 1991).

Дифференцировка монослоя ES клеток

Протокол бессывороточной нейронной индукции применялся, как описано
(Ин и Смит, 2003;
Ying et al., 2003b). ES клетки
высевали в 6-луночные планшеты с плотностью 1,5 × 10 5
клеток / лунку в среде N2B27 с LIF (100 единиц / мл). На следующий день (день 0)
среду заменили на N2B27 без LIF (плюс лиганды / ингибиторы). Средний был
после этого обновляется ежедневно. Для анализов клональной плотности ES-клетки высевали.
при 0.75 клеток / мм 2 (720 клеток / 6-луночный или 150 клеток / 4-луночный) в N2B27
плюс LIF на 2 дня. Затем среду заменили на N2B27 (плюс
лиганды / ингибиторы) и клетки, подаваемые через день. Рекомбинантный человеческий FGF4
(R&D Systems, 235-F4), FGF2 (R&D Systems, 233-FB) и FGF5 (Sigma,
F4537) были использованы в концентрации 5 нг / мл, 5 нг / мл и 10 нг / мл соответственно в
наличие 1 мкг / мл гепарина (Sigma, h4149). Человеческий рекомбинантный BMP4 (R&D
Systems, 314-BP) в концентрации 10 нг / мл. PD173074 (Sigma, P2499) использовался при 100
нг / мл (Mohammadi et al.,
1998), PD184352 (подарок Филипа Коэна) при 25 мкМ
(Davies et al., 2000) и
SU5402 (Calbiochem, 572630) при 5 мкМ
(Mohammadi et al., 1997).
Индукция мезодермы выполнялась, как описано
(Nishikawa et al., 1998) на
пластинки с коллагеном IV (BD Biosciences, 354428).

Анализ FACS

ES-клеток собирали с помощью буфера для диссоциации клеток (Gibco, 13151-014),
промывают PBS + 1% FBS, инкубируют с антителом против Pdgfrα в соотношении 1: 100
(Клон APA5; Chemicon, CBL 1366) и меченный вторичным антителом
(антитела против IgG-PE крысы) перед анализом на машине CyAN FACS.

Иммунофлуоресценция

Клетки фиксировали в 4% параформальдегиде (комнатная температура, 10 минут),
трижды промывали PBS, затем инкубировали в течение 1 часа в блокирующем буфере.
(PBS, 2% козья сыворотка, 0,1% Triton X-100). Первичные антитела разводили в
блокирующий буфер и наносить не менее 1 часа при комнатной температуре или
в течение ночи при 4 o ° C с последующими тремя промывками в PBS. Коза вторичная
антитела, конъюгированные с флуорофорами Alexa (молекулярные зонды), разбавляли
1: 1000 в блокирующем буфере и наносить на 1 час при комнатной температуре.В
клетки промывали дважды в PBS и в третий раз в PBS, содержащем DAPI (10 мкм
г / мл) перед получением изображений на инвертированной флуоресценции Olympus
микроскоп. Конфокальные изображения были получены с помощью конфокального прибора Leica TCSNT.
микроскоп и соответствующее программное обеспечение (Leica Microsystems). Первичные антитела
использовали анти-фосфо-p44 / 42 MAPK в концентрации 1: 200 (20G11; Cell Signaling Technology,
4376), анти-p44 / 42 MAPK при 1: 200 (Cell Signaling Technology, 9102),
антифосфогистон h4 в соотношении 1:20 000 (HTA28; Sigma, H9908), антифибрилларин в концентрации
1: 1000 (Abcam, ab4566), анти-Oct4 (также известный как Pou5f1 — геном мыши
Информатика) 1: 200 (C-10; Santa Cruz Biotechnology, sc-5279), anti-Sox2 at
1: 200 (Chemicon, AB5603), анти-TuJ1 (также известный как Tubb3) в концентрации 1: 1000 (Covance,
MMS-435P), анти-нестин в соотношении 1:10 (Rat-401, DSHB), анти-E-кадгерин (также известный как
кадгерин 1) в концентрации 1: 200 (ECCD2, 2 мг / мл, подарок Масатоши Такеичи, Кобе,
Япония) и антикератин 14 в соотношении 1: 10 000 (MK14, Covance). Фосфопептид, но
не нефосфорилированный контрольный пептид (Abcam, ab5255), блокировал все активированные
фосфо-Erk1 / 2 окрашивание (данные не представлены).

Иммуноблоттинг

Вестерн-блоттинг выполняли, как описано
(Saba-El-Leil et al., 2003).
Вкратце, лизаты цельных клеток (100 мкг) разделяли на 10% гелях SDS-PAGE,
переносится на нитроцеллюлозные мембраны и подвергается блоттингу на антифосфо-p44 / 42
MAPK в соотношении 1: 1000 и анти-p44 / 42 MAPK в соотношении 1: 1000 (оба описаны выше).В
вторичное антитело, анти-кроличий IgG-пероксидаза (Sigma, A6154), использовали при
1: 3000, а активность пероксидазы визуализировали с помощью SuperSignal West Pico.
Кит (Пирс).

Обратная транскриптаза (RT) -PCR

Тотальную РНК выделяли с использованием набора Absolutely RNA Kit (Stratagene, 400800),
и кДНК была сделана из 1 мкг общей РНК с использованием SuperScript II RT.
(Invitrogen) и праймеры oligo-dT. Праймеры и условия ПЦР перечислены в
Таблица 1. ПЦР в реальном времени
выполняется с помощью LightCycler 480 с использованием универсальной библиотеки датчиков
(Рош).Количественные праймеры ПЦР для нестина (вперед,
5′-CTGCAGGCCACTGAAAAGT-3 ‘; обеспечить регресс,
5’-TTCCAGGATCTGAGCGATCT-3 ‘) использовали с UPL-зондом № 2 (Roche,
04684982001) и праймеры для TATA-связывающего белка (TBP) (вперед,
5’-GGGGAGCTGTGATGTGAAGT-3 ‘; обеспечить регресс,
5’-CCAGGAAATAATTCTGGCTCA-3 ‘) использовали с зондом UPL № 97 (Roche,
04692144001).

Таблица 1.

Праймеры и условия для ПЦР с обратной транскриптазой

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Сначала мы исследовали способность мутантных ES-клеток Fgf4
(Уайлдер и др., 1997) в
подвергаются дифференцировке в отсутствие других индукторов. ES клетки были
культивируют в N2B27, определенной среде, в которой отсутствует сыворотка или ингибитор лейкемии
фактор (LIF) (Инь и Смит,
2003; Инь и др. ,
2003b). В отличие от клеток ES дикого типа и Fgf4 +/- ,
Fgf4 — / — ES клетки продуцировали очень мало нестин-положительных нервных клеток.
предшественников к 6-му дню и давали только спорадические TuJ1-положительные нейроны за счет
день 10 (рис. 1А-Д). В
блокада дифференцировки нервных клонов была очевидна на очень ранней стадии,
как показано на неспособности Fgf4-нулевых клеток активировать первичную регуляцию
нейронные маркеры Sox1 или нестин через 48 часов
(Рис.1F). Количественный
анализ экспрессии мРНК нестина на 5 день подтвердил иммуноокрашивание
результаты (рис. 1G). Нейронный
дифференциация может быть полностью восстановлена ​​путем добавления питательной среды
с рекомбинантным FGF4 или FGF2 при 5 нг / мл
(Рис. 1G-I). Количество ячеек
нестин-положительные по сравнению с Oct4-положительными клетками показали, что дифференцировка
Fgf4 — / — ES-клетки восстанавливаются до эффективности дикого типа посредством
Белок Fgf4 (рис. 1J). FGF
ингибитор рецептора (FGFR) PD173074
(Мохаммади и др., 1998) на
100 нг / мл полностью блокировали FGF-опосредованное восстановление (данные не показаны). Эти
результаты показывают, что нулевых клеток Fgf4- сохраняют нейральную дифференцировку
способности и что их недостаток в приверженности монокультур непосредственно
объясняется отсутствием FGF4. Интересно, что FGF5 не смог спасти
нейронная приверженность, указывающая на то, что в этом
действие. Это примечательно, потому что Fgf5 активируется после LIF.
вывод (см. ниже). В согласии с Stavridis et al.(Ставридис и др., 2007),
добавления FGF4 в течение первых 24 часов (10-дневного анализа) было достаточно для
вызвать полное восстановление нервной и нейрональной дифференцировки, предполагая, что
он действует как спусковой крючок для инициирования обязательств, а не требуется
непрерывно.

Большинство клеток Fgf4 — / — сохраняют экспрессию
маркер плюрипотентности Oct4 после отмены LIF
(Рис. 1D, E). Эти
Oct4-положительные клетки остаются жизнеспособными и пролиферативными в течение нескольких дней, а клетки
числа остаются такими же, как у культур дикого типа, в течение по крайней мере 8 дней.Таким образом, уменьшение числа нейронных производных в первую очередь связано с
снижение способности ES-клеток вступать в эту линию, а не от гибели
нервные клетки-предшественники в отсутствие стимуляции FGF. Нейронный
дифференцировку можно легко вызвать, если добавить FGF4 через 3 дня после LIF
вывод (данные не показаны), что указывает на то, что ES-клетки сохраняются в
недифференцированное состояние, а не выбор альтернативного обязательства
программы. Эти наблюдения подтверждают и расширяют предыдущие аргументы, что
Fgf4 — это аутоиндуктивный стимул для нейронной связи в ES-клетках.
(Lowell et al., 2006;
Ying et al., 2003b) и являются
согласуется с доказательствами необходимости передачи сигналов FGF для нервной
индукция в эмбрионах позвоночных (Streit et al.
др., 2000; Wilson et al. ,
2000; Ставридис и др.,
2007).

Рис. 1.

Fgf4 — / — ES-клетки дефицитны в нервной
индукция.
( A-E ) Иммуноокрашивание (слева; фазовый контраст, справа) для
Oct4 и нестин (A, D) и Oct4 и TuJ1 (B, C, E) у дикого типа (A, B),
Fgf4 +/- (C) и Fgf4 — / — ES клеток мыши
на 6-й (A, D) и 10-й (B, C, E) день монослойной нейральной дифференцировки
протокол.( F ) ОТ-ПЦР для нейронных маркеров Sox1 и нестина в
Fgf4 +/- и Fgf4 — / — ES ячеек в
условия самообновления на 2 день протокола нейронной индукции.
-актин использовали в качестве контроля загрузки. ( G ) Количественный
ОТ-ПЦР для нестина на 5-й день анализа нейральной дифференцировки. TBP,
ТАТА-связывающий белок. ( H , I ) Иммуноокрашивание на Oct4 и нестин
(H) и Oct4 и TuJ1 (I) Fgf4 — / — ES клеток, культивируемых в
FGF4 (5 нг / мл) в течение первых 24 часов 6-дневного (H) и 10-дневного (I) нервного
монослойный анализ. Масштабная линейка: 100 мкм. ( J ) Количество ячеек
Oct4-положительные, нестин-положительные и дважды отрицательные клетки для дикого типа,
Fgf4 — / — ES клеток и Fgf4 — / — ES клеток
обработанные FGF4 после 6 дней культивирования в N2B27 ( n = 3 для каждого
образец).

Добавление BMP к ES клеткам в N2B27 без LIF подавляет нервную
дифференциации и заставляет всю популяцию формировать листы больших плоских
клетки (рис. 2А, Б)
(Инь и др., 2003b). В
идентичность этих клеток, индуцированных BMP4, неизвестна. Они отрицательны для
нейронные маркеры Sox1 и нестин, но положительные по E-кадгерину, и поэтому
маловероятно, что это мезодермальный. Небольшая часть экспрессирует кератин 14,
предполагая, что они могут быть незрелыми эктодермальными производными (см. рис. S1 в
дополнительный материал). Предложен один механизм нейролизирующего действия
Передача сигналов FGF / Erk — это ингибирование передачи сигнала BMP через
фосфорилирование Smad1 (Kretzschmar et al.
al., 1997; Курода и др.,
2005; Pera et al.,
2003 г.). Поэтому мы исследовали отзывчивость BMP
Fgf4 — / — ES клеток. Эти клетки полностью сопротивлялись
дифференцировка в ответ на BMP4 и оставалась Oct4-положительной и
недифференцированные (рис. 2D). В
редкая нейрональная дифференцировка, наблюдаемая только для N2B27, была устранена,
предполагая, что передача сигналов BMP действовала
(Рис. 2C, D). Это было подтверждено
путем активации выражения Id1 и Id3
(Инь и др., 2003a) следующие
45-минутная стимуляция BMP4 Fgf4 — / — ES клеток
(Рис. 2J). Поразительно, когда
FGF4 был добавлен, дифференцированный ответ на BMP восстановился.
(Рис. 2E). Независимый
подтверждение этих результатов было получено при применении ингибитора FGFR
PD173074 в ES-клетки дикого типа. Это предотвратило дифференциацию в результате
Отказ от LIF (рис. 2F, G) и
к обработке BMP4 (рис. 2H, I).
Эти данные подтверждают важность наличия интактного сигнального пути FGF.
для отключения сигнализации BMP от поддержки самообновления
(Инь и др., 2003a) на
движущая не нейронная дифференциация.

Рис. 2.

Fgf4 — / — и ES-клетки дикого типа требуют FGFR
сигнализация многолинейной приверженности.
( A-E ) Иммуноокрашивание
(внизу; фазовый контраст, вверху) Oct4 и TuJ1 у мышей дикого типа (E14Tg2a)
ES-клетки на 7 день монослойной культуры только в N2B27 (A) или N2B27 с Bmp4
(B) и на Fgf4 — / — ES клетках только в N2B27 (C) с BMP4
(D) или с BMP4 и FGF4 (E).Обратите внимание, что зеленая флуоресценция в C и D
неспецифический, и необходимы как иммунопозитивность, так и морфология нейронов.
идентифицируют клетки как нейроны (Svendsen et al.
др., 2001). ( F , G ) Иммуноокрашивание (справа;
фазовый контраст, слева) для Oct4 в колонии E14Tg2a ES-клеток в отсутствие
LIF (F) или отсутствие LIF и присутствие PD173074 (G). ( H , I )
Иммуноокрашивание на Oct4 и Sox2 в ES-клетках E14Tg2a, культивируемых в BMP4 (H) или
BMP4 и PD173074 (I).Масштабная линейка: 100 мкм. ( J ) ОТ-ПЦР для
Id1 и Id3 после 45-минутной стимуляции BMP4. Β
-актин использовали в качестве контроля загрузки. ( K , L ) FACS
анализ экспрессии Pdgfrα в ES-клетках дикого типа через 5 дней
пластинки с коллагеном IV в отсутствие (K) или в присутствии (L) ингибитора FGFR
PD173074. ( M ) Анализ RT-PCR клеток дикого типа через 4 дня после
пластинки с коллагеном IV в присутствии или в отсутствие PD173074.

Проверить, ограничивается ли потребность в стимуляции FGF
эктодермальные клоны, мы исследовали дифференцировку мезодермы.Через 5 дней после
пластины, покрытые коллагеном IV, ES-клетки дикого типа проявляли ожидаемую индукцию
маркера параксиальной мезодермы Pdgfrα
(Nishikawa et al., 1998).
Однако в присутствии PD173074 эта индукция полностью исчезла.
(Рис. 2К, L). Экспрессия гена
анализ на 4 день показал, что экспрессия брахьюри и эомезодермина
( Eomes ) был предотвращен PD173074, и подавление
маркеры плюрипотентности Oct4 и Rex1 (также известные как
Zfp42 — Mouse Genome Informatics) не встречалась.
(Рис.2М). Это говорит о том, что
Передача сигналов FGF в ES-клетках может инициировать передачу ES-клеток множеству
родословные.

Рис. 3.

Активность Erk1 / 2 в ES-клетках зависит от FGF. ( A-D )
Иммуноокрашивание (слева; фазовый контраст, справа) на фосфо-Erk1 / 2 (pErk1 / 2) в
мышиные ES-клетки, культивированные в сыворотке плюс LIF в течение 14 часов в контроле с носителем
(DMSO, A, C), ингибитор активации MEK PD184352 (B) или ингибитор FGFR
SU5402 (D).Каждая пара изображений была сделана с одинаковым временем экспозиции. Шкала
бар: 100 мкм для A, B; 50 мкм для C, D. ( E ) Иммуноблот
Fgf4 — / — и Fgf4 +/- лизаты ES клеток
культивировали в бессывороточной среде N2B27 с или без LIF в течение 24 часов.

Отсутствие Fgf4 недостаточно для предотвращения дифференцировки ES-клеток
полностью, однако. После многоклеточной агрегации
Fgf4 — / — ES клетки обнаруживают некоторую индукцию маркеров зародышевого листка
(не показаны), и они могут образовывать сложные тератомы, хотя и с меньшей частотой.
чем Fgf4 +/- ES клеток
(Уайлдер и др., 1997). Этот
может быть связано с активацией других FGF, особенно Fgf8, при агрегации
(Wang et al., 2006) и
FGF или другие стимулы, предоставляемые хозяином после пересадки.

Для оценки механизма действия FGF мы исследовали активацию
митоген-активированные протеинкиназы Erk1 / 2 (Erk1, также известный как Mapk3 и p44
MAPK, а Erk2 также известен как Mapk1 и p42 MAPK — геном мыши
Информатика). Культура ингибитора FGFR SU5402 уменьшилась, но не
полностью устранить, активированное иммуноокрашивание фосфо-Erk1 / 2 (pErk1 / 2),
по сравнению с ES-клетками, культивируемыми в PD184352, мощном антагонисте Erk
активирующие ферменты Mek1 / 2 (Map2k1 / k2 — Mouse Genome Informatics)
(Дэвис и др., 2000)
(Рис. 3A-D). Поэтому мы
исследовали специфическую роль Fgf4 в активации Erk1 / 2 в ES клетках. К
исключить аутокринную стимуляцию мы снова воспользовались Fgf4 -null
ES-клетки (Wilder et al.,
1997). Иммуноблоттинг показал значительное снижение стабильного состояния.
Фосфорилирование Erk1 / 2 в Fgf4 — / — ES клетках по сравнению с
гетерозиготные клетки в бессывороточной среде
(Рис. 3E). Наличие
самообновляющийся цитокин LIF, который активирует Erk в дополнение к Stat3
(Бурдон и др., 2002;
Burdon et al., 1999), только
частично восстановил уровни pErk в нулевых ячейках и не увеличивал
pErk в гетерозиготных клетках. В соответствии с этими наблюдениями острый (15
минута) стимуляция FGF4 привела к значительному увеличению Erk1 / 2
фосфорилирование, тогда как стимуляция LIF и сывороткой давала более умеренное
увеличение (не показано). Эти данные и данные прилагаемой рукописи
(Ставридис и др., 2007),
установить, что Fgf4 является мощным активатором пути pErk в
недифференцированные ES-клетки.

Мы исследовали распределение активного Erk1 / 2 в ES-клетках дикого типа.
Иммунофлуоресцентное окрашивание на pErk1 / 2 было ядерным и цитоплазматическим (см.
Рис. S2A, B в дополнительном материале). Случайные клетки показали интенсивный
сигнал иммунофлуоресценции по всей клетке. Совместная локализация с
митотический маркер фосфогистон h4 (Goto et al.
al., 1999) идентифицировали их как митотические клетки (см. рис. S2C в
дополнительный материал), что также сообщалось для иммуноокрашивания pErk в яйце
цилиндрический эмбрион (Corson et al.,
2003 г.). В клетках вне М фазы диффузное цитоплазматическое окрашивание
была очевидна вместе с точечными ядерными тельцами в большинстве клеток. Этот субядерный
локализация совпала с ядрышковым маркером фибрилларина (см. рис. S2D в
дополнительный материал) и согласуется с ролью Erk1 / 2 в РНК
активация полимеразы I и синтез рРНК
(Чжао и др. , 2003). Мы
пришли к выводу, что путь Erk постоянно активируется в недифференцированных ES
клетки преимущественно посредством передачи сигналов через FGFR и потенциально функционально
как в ядре, так и в цитоплазме.

Поскольку Erk сильно активируется передачей сигналов FGF в ES клетках
(Рис. 3E), мы исследовали,
этот путь может играть решающую роль в приверженности к родословной. Erk1 и Erk2 являются
считается, что имеет эквивалентную биохимическую активность, но Erk2 присутствует в более высоких
уровни в ES-клетках (рис. 3E).
Erk2 — / — эмбрионов образуют бластоцисту, имплантируют и производят
эпибласт, но они не могут продуцировать мезодерму
(Yao et al., 2003) и умереть
из-за серьезных дефектов трофобласта
(Саба-Эль-Лейл и др., 2003).
Линии клеток ES были получены из бластоцист, гомозиготных по нулевой
Аллель Erk2 . Они жизнеспособны и размножаются с кинетикой, аналогичной
нормальные ES-клетки. Хотя морфологически они кажутся более уплощенными, чем
ES-клетки дикого типа, они экспрессируют полный спектр маркеров плюрипотентности. Эти
клетки показали значительное снижение pErk1 / 2 за счет иммунофлуоресценции (не показано)
и иммуноблоттинг-анализы (рис.
4А). В определенном протоколе нейронной индукции два
Erk2 — / — Клоны ES клеток (B1, B3) показали скудные доказательства
дифференциация (рис.4Б-Г). В
Фактически, оба клона могут быть пассированы в отсутствие LIF в бессывороточном N2B27.
среда и продолжала экспрессировать маркеры клеток ES Oct4 и
Наног . Без LIF они показали повышенную регуляцию Fgf5
(Рис. 4E), что обычно
экспрессируется на низких уровнях в культурах клеток ES. Fgf5 широко используется
в качестве раннего маркера дифференцировки ES-клеток и предлагается отмечать
формирование популяции, соответствующей эпибласту на стадии яйцевидного цилиндра
(Хауб и Гольдфарб, 1991;
Rathjen et al., 1999;
Шен и Ледер, 1992).
Однако мы не наблюдали соответствующего изменения в выражении
Rex1 , который подавляется в постимплантационном эпибласте
(Rogers et al. , 1991) и является
сообщается, что демонстрирует реципрокную экспрессию с Fgf5 во время ES-клетки
дифференцировка (Rathjen et al.,
1999). Кроме того, когда LIF был добавлен обратно в культуры,
Экспрессия Fgf5 была потеряна в течение 2 дней, без изменений в клетке
пролиферация или очевидная гибель клеток (рис.
4E). Следовательно, выражение Fgf5 выглядит следующим образом:
обратимы и прямо или косвенно регулируются путем LIF.

Рис. 4.

Erk2 — / — ES-клетки сильно дефицитны в нервной системе.
и мезодермальная приверженность
. ( A ) Иммуноблоттинг на фосфо-Erk1 / 2
(pErk1 / 2) и общее Erk1 / 2 из сывороточного голодания Erk2 +/- и
Erk2 — / — мышиных ES-клеток, которые стимулировали фетальным
бычья сыворотка (FBS), LIF или нестимулированная (-). ( B-D ) Иммуноокрашивание
(слева; фазовый контраст, справа) для нестина в Erk2 +/- клеток
(A) и два независимых Erk2 — / — клонов ES клеток (B, C)
фиксируется на 6-й день нейрональной монослойной культуры. Масштабная линейка: 50 мкм. ( E )
ОТ-ПЦР для Oct4, Fgf5, Rex1 и β -актина (в качестве загрузки
контроль) на РНК, выделенной из двух линий клеток Erk2 — / — ES
(B1, B3), которые поддерживали в среде N2B27 без LIF. Параллельные культуры
подвергались воздействию LIF в течение 2 дней (+ LIF) перед выделением РНК. ( F )
Анализ RT-PCR дикого типа и двух Erk2 — / — (B1, B3) ES
линии клеток на 4-й день дифференцировки монослоя мезодермы.( G ) FACS
анализ на экспрессию Pdgfrα дикого типа и
Erk2 — / — ES клетки на 5 день монослоя мезодермы
дифференциация.

В агрегированной культуре Erk2 — / — клеток образовались высоко
уплотненные комки с небольшими признаками дифференциации. Однако это могло быть связано с
частично к гибели дифференцированных клеток со сниженным pErk. Поэтому мы
использовали протокол дифференцировки монослойной мезодермы
(Nishikawa et al. , 1998) до
оценить прямые последствия удаления Erk2 при обязательстве.Обе
Erk2 — / — клонов были жизнеспособными и пролиферирующими в этих
условия. Однако они не показали повышения экспрессии брахьюри и
сохранены маркеры плюрипотентности Rex1, Nanog и Oct4
(Рис. 4E) и не удалось
дифференцируются в Pdrfrα-положительные клетки боковой мезодермы
(Рис. 4G).

В совокупности эти данные демонстрируют, что путь FGF-Erk1 / 2
имеет решающее значение для дифференциации ES-клеток как нервных, так и ненейронных
родословные.Наши данные не исключают участия пути PI3-киназы в
FGF-опосредованная дифференцировка (Chen et al.,
2000) [но см. Сопроводительное исследование
(Ставридис и др., 2007)].
Однако центральная роль пути Erk согласуется с предыдущими
наблюдения за влиянием мутации в адапторной молекуле Grb2 на
дифференцировка в ответ на отмену LIF в присутствии сыворотки
(Cheng et al., 1998;
Hamazaki et al., 2004),
подавление нервной дифференцировки ингибиторами MEK
(Lowell et al. , 2006;
Ин и др., 2003b;
Ставридис и др., 2007), и
потребность в Erk2 для образования мезодермы у эмбриона
(Яо и др., 2003). Мы показываем
что FGF-Erk не действует, блокируя передачу сигнала BMP в ES-клетках, но
необходимо для перенаправления эффекта передачи сигналов BMP. Только после FGF-Erk
стимуляция действует ли BMP, чтобы отвлечь ES-клетки, выходящие из самообновления, от
нервная судьба. Эти данные ES-клеток согласуются с данными цыплят.
и исследования эмбрионов Xenopus показывают, что антинейральное действие BMP
вторичный по отношению к действию FGF на наивный эпибласт
(Стерн, 2005).Перспектива
поэтапного развития плюрипотентных клеток в направлении спецификации клонов
позволяет легко согласовать стандартную модель нейронной индукции в
эмбрионы позвоночных (Вильсон и
Hemmati-Brivanlou, 1995) с инициирующим сигналом FGF.

Ключевым выводом этого исследования является то, что без ввода FGF-Erk1 / 2 прогрессирование
ES-клеток к нейральному или мезодермальному клону блокируется и
существенные изменения в экспрессии ключевых маркеров плюрипотентности Oct4, Nanog
и Rex1 не наблюдаются. На основании этих наблюдений мы предлагаем
безудержная активность каскада Рас-Эрк1 / 2 является основным стимулом для
наивные ES-клетки для выхода из процесса самообновления и приобретения компетенции для зародышевого листка
сегрегация. В самообновляющихся культурах клеток ES обеспечение LIF действует через
Stat3 и вмешивается после pErk, чтобы отменить автоиндуктивную способность
из Fgf4. В отсутствие LIF мы предполагаем, что путь FGF-Erk активирует
клетки вступают в переходную стадию, аналогичную эпибласту цилиндра яйца. Клетки
в этом компетентном состоянии перейдет к нейронной судьбе в ответ на продолжающийся FGF
и стимуляция Notch (Lowell et al.,
2006), но очень восприимчивы к перенаправлению другими
индуктивные сигналы, такие как члены суперсемейства TGFβ.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье доступны на
http://dev.biologies.org/cgi/content/full/134/16/2895/DC1

Благодарности

Мы благодарим Энджи Риццино и Джанет Россант за предоставление мутантных ES-клеток.
линии, Shin-Ichi и Satomi Nishikawa для реагентов для мезодермы.
индукции, и Мариос Ставридис, Кейт Стори, Салли Лоуэлл, Pleasantine Mill,
Кейсуке Кадзи и Стивену Полларду за критические обсуждения и техническую помощь
и обмен неопубликованными данными.Т.К. был профинансирован болезнью Паркинсона
Society UK и Stem Cell Sciences PLC. Работа поддержана Медицинским
Исследовательский совет и Исследовательский совет биотехнологии и биологических наук
Соединенное Королевство, Интегрированный проект Европейской комиссии «EuroStemCell»,
и грант Национального института рака Канады С. С.М. держит
Кафедра исследований в области сотовой связи Канады. В КАЧЕСТВЕ. это медицинское исследование
Совет профессор.

  • © Компания Биологов Лимитед
    2007

Список литературы

  1. Брук, Ф.А. и Гарднер Р. Л. (1997). В
    происхождение и эффективное получение эмбриональных стволовых клеток мыши.
    Proc. Natl. Акад. Sci. Соединенные Штаты Америки
    94 5709
    -5712.

  2. Бердон, Т., Стрейси, К., Чемберс, И., Николс, Дж. И Смит,
    А.
    (1999). Подавление передачи сигналов SHP-2 и ERK способствует
    самообновление эмбриональных стволовых клеток мыши. Dev. Биол.
    210, 30-43.

  3. Бурдон Т., Смит А.и Savatier, P. (2002).
    Сигнализация, клеточный цикл и плюрипотентность в эмбриональных стволовых клетках.
    Trends Cell Biol. 12 432
    -438.

  4. Чемберс, И. и Смит, А. (2004). Самообновление
    тератокарциномы и эмбриональных стволовых клеток. Онкоген
    23,7150
    -7160.

  5. Чен, Й., Ли, Х., Эшваракумар, В. П., Сегер, Р. и Лонаи,
    С.
    (2000). Передача сигналов фактора роста фибробластов (FGF) через
    PI 3-киназа и Akt / PKB необходимы для дифференцировки эмбриоидных тел.Онкоген 19,3750
    -3756.

  6. Ченг, А. М., Сакстон, Т.М., Сакаи, Р., Кулкарни, С., Мбамалу,
    Г., Фогель, В., Торторис, К. Г., Кардифф, Р. Д., Кросс, Д. К., Мюллер, В. Дж.
    и другие.
    (1998). Grb2 млекопитающих регулирует несколько этапов
    эмбриональное развитие и злокачественная трансформация.
    Ячейка 95,793
    -803.

  7. Корсон, Л. Б., Яманака, Ю., Лай, К. М. и Россант, Дж.
    (2003). Пространственные и временные паттерны передачи сигналов ERK во время
    эмбриогенез мыши.Разработка
    130,4527
    -4537.

  8. Дэвис, С. П., Редди, Х., Кайвано, М. и Коэн, П.
    (2000). Специфика и механизм действия некоторых широко используемых
    ингибиторы протеинкиназ. Biochem. Дж.
    351,95
    -105.

  9. Эванс, М. Дж. И Кауфман, М. Х. (1981).
    Создание в культуре плюрипотенциальных клеток из эмбрионов мыши.
    Природа 292 154
    -156.

  10. Гото, H. , Томоно, Ю., Аджиро, К., Косако, Х., Фудзита, М.,
    Сакураи, М., Окава, К., Ивамацу, А., Окигаки, Т., Такахаши, Т. и др.

    (1999). Идентификация нового сайта фосфорилирования на гистоне
    h4 в сочетании с конденсацией митотических хромосом. J. Biol.
    Chem. 274,25543
    -25549.

  11. Хамазаки, Т., Ока, М., Яманака, С. и Терада, Н.
    (2004). Агрегация эмбриональных стволовых клеток индуцирует Nanog
    репрессия и первичная дифференцировка энтодермы.J. Cell
    Sci. 117,5681
    -5686.

  12. Хауб О. и Гольдфарб М. (1991). Выражение
    ген фактора роста фибробластов-5 в эмбрионе мыши.
    Развитие 112,397
    -406.

  13. Иванова Н., Добрин Р., Лу Р., Котенко И., Леворсе Дж.,
    ДеКост К., Шафер X., Лун Ю. и Лемишка И. Р.

    (2006). Рассечение самообновления стволовых клеток с помощью РНК
    вмешательство. Природа
    442 533
    -538.

  14. Жирманова Л. , Афанасьев М., Гоберт-Госсе С., Маркосян С.
    и Savatier, P.
    (2002). Дифференциальные взносы ERK
    и PI3-киназы для регуляции экспрессии циклина D1 и для контроля
    переход G1 / S в эмбриональных стволовых клетках мыши.
    Онкоген 21,5515
    -5528.

  15. Келлер, Г. (2005). Эмбриональные стволовые клетки
    дифференциация: наступление новой эры в биологии и медицине.Genes Dev. 19,1129
    -1155.

  16. Кусков, В., Лако, Г., Шванц, С., Фелинг, Х. Дж. И
    Келлер, Г.
    (2005). Последовательное развитие гемопоэтических
    и сердечная мезодерма во время дифференцировки эмбриональных стволовых клеток.
    Proc. Natl. Акад. Sci. Соединенные Штаты Америки
    102,13170
    -13175.

  17. Кречмар, М., Дуди, Дж. И Массагу, Дж.
    (1997). Противоположные сигнальные пути BMP и EGF сходятся на
    Медиатор семейства TGF-бета Smad1.Природа
    389 618
    -622.

  18. Курода, Х., Фуэнтеалба, Л., Икеда, А., Реверсейд, Б. и Де
    Робертис, Э. М.
    (2005). Нейронная индукция по умолчанию:
    неврализация диссоциированных клеток Xenopus опосредуется активацией Ras / MAPK.
    Genes Dev. 19 1022
    -1027.

  19. Лоуэлл, С., Бенчуа, А., Хиви, Б. и Смит, А. Г.
    (2006). Notch способствует проникновению в нейронную линию плюрипотентности.
    эмбриональные стволовые клетки.PLoS Biol.
    4, е121.

  20. Ма, Ю. Г., Росфьорд, Э., Хьюберт, К., Уайлдер, П., Тисман, Дж.,
    Келли, Д. и Риццино, А.
    (1992). Транскрипционная регуляция
    мышиного гена k-FGF в линиях эмбриональных клеток. Dev.
    Биол. 154,45
    -54.

  21. Мартин Г. Р. (1981). Изоляция
    линия плюрипотентных клеток из ранних эмбрионов мыши, культивируемых в кондиционированной среде
    стволовыми клетками тератокарциномы. Proc. Natl. Акад. Sci.
    США 78,7634
    -7638.

  22. Mohammadi, M., McMahon, G., Sun, L., Tang, C., Hirth, P., Yeh,
    Б.К., Хаббард, С.Р. и Шлессингер, J.
    (1997). Структуры
    тирозинкиназного домена рецептора фактора роста фибробластов в комплексе
    с ингибиторами. Наука
    276 955
    -960.

  23. Мохаммади, М., Фроум, С., Хэмби, Дж. М., Шредер, М. К., Панек,
    Р. Л., Лу, Г. Х., Елисеенкова, А.В., Грин, Д., Шлессингер, Дж. И Хаббард,
    С. Р.
    (1998). Кристаллическая структура ингибитора ангиогенеза
    связаны с доменом тирозинкиназы рецептора FGF. EMBO
    J. 17,5896
    -5904.

  24. Нисикава, С. И., Нисикава, С., Хирасима, М., Мацуёси, Н.
    и Kodama, H.
    (1998). Прогрессивный анализ клонов по клеткам
    сортировка и культура идентифицируют клетки FLK1 + VE-кадгерин + в точке расхождения
    эндотелиальные и кроветворные линии.Разработка
    125,1747
    -1757.

  25. Нива, Х., Тоёка, Ю., Симосато, Д., Штрампф, Д., Такахаши,
    К., Яги Р. и Россант Дж.
    (2005). Взаимодействие между
    Oct3 / 4 и Cdx2 определяют дифференцировку трофэктодермы.
    Ячейка 123,917
    -929.

  26. Пера, Э. М., Икеда, А., Эйверс, Э. и Де Робертис, Э. М.
    (2003). Интеграция сигналов IGF, FGF и анти-BMP через Smad1
    фосфорилирование в нервной индукции.Genes Dev.
    17 3023
    -3028.

  27. Цюй, К. К. и Фенг, Г. С. (1998). Шп-2 имеет
    положительная регуляторная роль в дифференцировке и пролиферации ES-клеток.
    Онкогены 17 433
    -439.

  28. Ратиен, Дж., Лейк, Дж. А., Беттесс, М. Д., Вашингтон, Дж. М.,
    Чапмен, Г. и Ратхен, П. Д.
    (1999). Формирование
    примитивная эктодерма, подобная клеточной популяции, EPL-клетки, из ES-клеток в ответ
    к биологически полученным факторам. J. Cell Sci.
    112 601
    -612.

  29. Роджерс, М. Б., Хослер, Б. А. и Гудас, Л. Дж.
    (1991). Специфическая экспрессия цинка, регулируемого ретиноевой кислотой
    finger ген, Rex-1, в преимплантационных эмбрионах, трофобластах и ​​сперматоцитах.
    Развитие 113,815
    -824.

  30. Ру, П. П. и Бленис, Дж. (2004). ERK и p38
    MAPK-активируемые протеинкиназы: семейство протеинкиназ с разнообразными
    биологические функции.Microbiol. Мол. Биол. Ред.
    68 320
    -344.

  31. Саба-Эль-Лейл, М. К., Велла, Ф. Д., Верне, Б., Вуазен, Л., Чен,
    Л., Лабрек, Н., Энг, С. Л. и Мелош, С.
    (2003). An
    основная функция митоген-активируемой протеинкиназы Erk2 у мышей
    развитие трофобласта. EMBO Rep.
    4, 964-968.

  32. Шен М. и Ледер П. (1992). Лейкемия
    ингибирующий фактор экспрессируется доимплантационной маткой и выборочно
    блокирует образование примитивной эктодермы in vitro. Proc. Natl. Акад.
    Sci. США 89,8240
    -8244.

  33. Смит А. Г. (1991). Культура и
    дифференцировка эмбриональных стволовых клеток. J. Tissue Cult.
    Методы 13,89
    -94.

  34. Smith, A. (2001a). Эмбриональные стволовые клетки. В
    Биология стволовых клеток (ред. Д. Р. Маршак, Р. Л. Гарднер)
    и Д. Готтлиб), стр. 205-230. Нью-Йорк: холодная весна
    Пресса лаборатории гавани.

  35. Смит, А.G. (2001b). Стебель, полученный из эмбриона
    клетки: мышей и людей. Анну. Rev. Cell Dev. Биол.
    17 435
    -462.

  36. Ставридис, М. П., Ланн, Дж. С., Коллинз, Б. Дж. И Стори, К.
    Г.
    (2007). Дискретный период передачи сигналов Erk1 / 2, индуцированной FGF
    требуется для спецификации нейронов позвоночных.
    Развитие 134,2889
    -2894.

  37. Стерн, К. Д. (2005). Нейронная индукция: старые
    проблема, новые открытия, еще вопросы.Разработка
    132,2007
    -2021.

  38. Streit, A., Berliner, A.J., Papanayotou, C., Sirulnik, A. and
    Стерн, К. Д.
    (2000). Инициирование нервной индукции с помощью FGF
    сигнализация перед гаструляцией. Природа
    406, 74-78.

  39. Свендсен, К. Н., Бхаттачарья, А. и Тай, Ю. Т.
    (2001). Нейроны из стволовых клеток: предотвращение кризиса идентичности.
    Nat. Rev. Neurosci. 2 831
    -834.

  40. Тада, С., Эра, Т., Фурусава, К., Сакураи, Х., Нисикава, С.,
    Киношита, М., Накао, К., Чиба, Т. и Нисикава, С.
    (2005).
    Характеристика мезэндодермы: точка расхождения дефинитивной энтодермы
    и мезодерма в культуре дифференцировки эмбриональных стволовых клеток.
    Развитие 132,4363
    -4374.

  41. Thisse, B. and Thisse, C. (2005). Функции и
    регуляции передачи сигналов фактора роста фибробластов во время эмбрионального
    разработка. Dev. Биол.
    287 390
    -402.

  42. Ван, К., Ся, К., Биан, В., Лю, Л., Лин, В., Чен, Ю. Г., Анг,
    С. Л. и Цзин Н.
    (2006). FGF8, индуцированный агрегацией клеток
    повышение важно для нейральной дифференцировки клеток P19. Мол.
    Биол. Ячейка 17,3075
    -3084.

  43. Уайлдер, П. Дж., Келли, Д., Бригман, К., Петерсон, К. Л., Ноулинг,
    Т., Гао, К. С., МакКомб, Р. Д., Капеччи, М. Р. и Риццино, А.

    (1997). Инактивация гена FGF-4 в эмбриональных стволовых клетках
    изменяет рост и / или выживаемость их раннего дифференцированного потомства.Dev. Биол. 192 614
    -629.

  44. Уилсон, П. А. и Хеммати-Бриванлу, А. (1995).
    Индукция эпидермиса и ингибирование нервной судьбы с помощью Bmp-4.
    Природа 376 331
    -333.

  45. Уилсон, С. И., Грациано, Э., Харланд, Р., Джессел, Т. М. и
    Эдлунд, Т.
    (2000). Ранняя потребность в передаче сигналов FGF в
    приобретение судьбы нервных клеток у куриного эмбриона. Curr.
    Биол. 10 421
    -429.

  46. Яо, Й., Ли, В., Ву, Дж., Германн, У. А., Су, М. С., Куйда, К.
    и Баучер, Д. М.
    (2003). Регулируется внеклеточным сигналом
    киназа 2 необходима для дифференцировки мезодермы. Proc. Natl.
    Акад. Sci. США 100,12759
    -12764.

  47. Ин, К. Л. и Смит, А. Г. (2003). Определенный
    условия для нейронной приверженности и дифференциации. Meth.
    Энзимол. 365 327
    -341.

  48. Инь, К.Л., Николс, Дж., Чемберс, И. и Смит, А.
    (2003a). Индукция BMP белков Id подавляет дифференцировку
    и поддерживает самообновление эмбриональных стволовых клеток в сотрудничестве со STAT3.
    Ячейка 115 281
    -292.

  49. Ин, К. Л., Ставридис, М., Гриффитс, Д., Ли, М. и Смит,
    А.
    (2003b). Превращение эмбриональных стволовых клеток в
    нейроэктодермальные предшественники в адгезивной монокультуре. Nat.
    Biotechnol. 21 183
    -186.

  50. Чжао, Дж., Юань, X., Frodin, M. и Grummt, I.
    (2003). ERK-зависимое фосфорилирование транскрипции
    фактор инициации TIF-IA необходим для транскрипции РНК-полимеразы I и
    рост клеток. Мол. Клетка
    11 405
    -413.

Проект LRRK2 и болезни Паркинсона

LRRK2 и проект болезни Паркинсона

Имя

Расположение

Поставщик

Каталожный номер

Цель / эффект

ЛРРК2-ИН-1

морозильная камера перед лабораторией (2-й ящик снизу)

23. 10.14, 10 мМ в ДМСО

Д.Алесси / Мерк

438193

ЛРРК2

GNE-0877

Ящик Лейлы -80 ° C (аликвоты)

16.09.15, 10 мМ в ДМСО

Селлекем

S7367

GSK2578215A

Ящик Лейлы -80 ° C (аликвоты)

22.02.16, 10 мМ в ДМСО

использование при 500 нм окончательное

Селлекем

S7664

LRRK2 Ингибитор III, HG-10-102-01

Ящик Лейлы -20 ° C (аликвоты)

22. 02.16, 10 мМ в ДМСО

использование при 500 нм окончательное

Мерк Миллипор

438195

Рапамицин

Ящик Лейлы -80 ° C (аликвоты)

10.09.15, 10 мМ в ДМСО

использовать при 1 мкМ в конце

Селлекем

S1039

MTOR (увеличивает пигментацию)

PTU (N-фенилтиомочевина)

Скамейка Лейлы (пудра)

10.09.15, 200 мМ в EtOH

-20 ° C (Эппендорф)

использование при 200 мкМ окончательное

СИГМА

103-85-5

Тирозиназа (уменьшает пигментацию

L-допа / 3,4-дигидрокси-L-фенилаланин

Скамейка Лейлы (пудра)

СИГМА

Д 9628

Субстрат тирозиназы (предшественник меланина)

CCCP

морозильная камера 2, -20 ° C (аликвоты)

100 мМ в ДМСО

использовать при 10 мкМ в конце

Протонофор

Деферипрон / DFP / 3-гидрокси-1,2-диметил-4 (1H) -пиридон

Скамейка Лейлы (пудра)

Свежий раствор 5 мМ (в воде)
нагревать до 95 ° C,
стерильный фильтрованный

использовать на 1 мм в конце

СИГМА

379409

Хелатор железа

Phos-tag ™

Масса порошка (2 мг) Фрайд № 3, ящик № 6

21/12/16 Раствор в стерилине 5 мМ Phos-tagTM AAL Раствор, содержащий 3% (об. / Об.) MeOH Холодильник № 1, ящик № 3

Alphalabs (Институт Вако Нард) 300-93523 Акриламид AAL-107 фосфатная метка фосфатно-аффинный электрофорез в SDS-PAGE

Форбол 12-миристат 13-ацетат

(TPA)

Ящик Лейлы -80 ° C (аликвоты)

25.07.16 2 мМ в чистом EtOH и

40 мкМ в PBS 1% сыворотке

использование при 200 нм окончательное

СИГМА P8139 Мощный промотор опухоли активирует протеинкиназу C

Copyright 2016 © — Сайт разработан Лейлой Рочин

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *