HomeРазноеНатрия хлорид эском: Аптека Ригла – забронировать лекарства в аптеке и забрать самовывозом по низкой цене в Москва г.

Натрия хлорид эском: Аптека Ригла – забронировать лекарства в аптеке и забрать самовывозом по низкой цене в Москва г.

Содержание

Натрия хлорид (фл. 0,9% 400мл), Эском

Страна

Россия

Страна производства может меняться в зависимости от партии товара. Детальную
информацию уточняйте у оператора при подтверждении заказа.

Действующее вещество

Натрия хлорид

Состав

1 ампула содержит: натрия хлорид 3600 мг

Фармакологическое действие

Ионы натрия и хлора являются важнейшими неорганическими компонентами внеклеточной жидкости, поддерживающими соответствующее осмотическое давление плазмы крови и внеклеточной жидкости. Изотонический раствор восполняет дефицит жидкости в организме при дегидратации. Гипертонический раствор натрия хлорида при в/в введении обеспечивает коррекцию осмотического давления внеклеточной жидкости и плазмы крови. При местном применении в офтальмологии натрия хлорид оказывает противоотечное действие.

Показания к применению

Изотонический раствор: дегидратация различного генеза. Для поддержания объема плазмы крови во время и после операций. В качестве растворителя для различных препаратов.
Гипертонический раствор: нарушения водно-электролитного обмена: дефицит ионов натрия и хлора; гипоосмолярная дегидратация различного генеза (вследствие длительной рвоты, диареи, ожогов; при желудочной фистуле, легочном кровотечении, кишечном кровотечении).
Глазные капли и мазь: раздражение роговицы при воспалительных и аллергических заболеваниях (в составе комбинированной терапии).

Способ применения

Изотонический раствор натрия хлорида вводят в/в, п/к и в клизмах, а также используют для промывания ран, глаз, слизистой носовой полости. Чаще вводят в/в, в зависимости от клинической ситуации — до 3 л/сут.
Гипертонический раствор натрия хлорида вводят в/в. Разовая доза для в/в струйного введения может составлять 10-30 мл. При состояниях, требующих немедленного восполнения ионов натрия и хлора, препарат вводят в/в капельно в дозе 100 мл.
Местно и наружно применяют в зависимости от используемой лекарственной формы и схемы лечения.

Взаимодействие

NaCl совмещается с большинством лекарств. Именно это его свойство обуславливает применение раствора для разведения и растворения ряда препаратов.
При разведении и растворении нужно обязательно контролировать совместимость препаратов визуально, определяя, не появляется ли в процессе осадок, не меняется ли цвет и др.
Плохо совмещается с норадреналином.
При одновременном назначении препарата с кортикостероидами важно постоянно отслеживать содержание электролитов в крови.
При параллельном приеме понижается гипотензивное действие Эналаприла и Спираприла.
Несовместим Натрия Хлорид со стимулятором лейкопоэза Филграстимом, а также с полипептидным антибиотиком Полимиксин В.
Есть данные о том, что изотонический раствор увеличивает биодоступность лекарств.
При разведении раствором порошкообразных антибиотиков они усваиваются организмом полностью.

Побочное действие

Возможно: тошнота, рвота, диарея, спазмы желудка, жажда, слезотечение, потливость, лихорадка, тахикардия, артериальная гипертензия, нарушение функции почек, отеки, одышка, головная боль, головокружение, беспокойство, слабость, подергивание и гипертонус мышц.
При наружном и местном применении побочные реакции к настоящему времени не установлены.

Противопоказания

Гипернатриемия, состояния гипергидратации, угроза отека легких, мозга.

Передозировка

При передозировке пациент может чувствовать тошноту, страдать от рвоты и диареи, у него могут развиваться боли в животе, лихорадка, учащенное сердцебиение. Также при передозировке могут повышаться показатели артериального давления, развиваться отек легких и периферические отеки, почечная недостаточность, судороги мышц, слабость, головокружение, генерализованные судороги, кома. При чрезмерном введении раствора может развиться гипернатриемия.
При чрезмерном поступлении в организм может развиться гиперхлоримический ацидоз.
Если натрия хлорид применяется для растворения лекарств, то в основном передозировка связана со свойствами тех препаратов, которые подвергаются разведению.
При непреднамеренном избыточном введении NaCl важно прекратить этот процесс и оценить, есть ли негативнее симптомы у пациента. Практикуется симптоматическое лечение.

Особые указания

С осторожностью применяют большие объемы натрия хлорида у пациентов с нарушением выделительной функции почек, при гипокалиемии. Введение больших количеств раствора может привести к хлоридному ацидозу, гипергидратации, увеличению выведения калия из организма.
Гипертонический раствор не применяют п/к и в/м.
При длительном применении необходим контроль концентрации электролитов в плазме и суточного диуреза.
Температура инфузионного раствора должна составлять 38°С.

Условия отпуска в аптеках

По рецепту

Натрия хлорид (раствор для инфузий 0,9 % 200 мл бутыл.) Эском НПК ОАО, г. Ставрополь Россия в аптеках города Каменск-Уральского

 








Номер регистрационного удостоверения:

 P N001119/01

Дата регистрации:

 28.10.2011

Дата окончания действия регистрационного удостоверения:

 

Юридическое лицо, на имя которого выдано регистрационное удостоверение:

 Открытое акционерное общество Научно-производственный концерн ЭСКОМ — Россия

Производитель:

 Открытое акционерное общество Научно-производственный концерн ЭСКОМ — Россия

Торговое наименование

лекарственного препарата:

 Натрия хлорид

Международное непатентованное или химическое наименование:

 Натрия хлорид

Упаковки:


















п Идентификатор формы выпуска (idPack) Лекарственная форма Дозировка Кол-во в потр. уп. Первичн.упак Кол-во в перв.уп. Потреб.упак Кол-во перв. уп. Комплектность Срок годности
1 203912 раствор для инфузий отсутствует 1 бутылка стеклянная 100,000 пачка картонная 1 одна инструкция по медицинскому применению 2 г
2 203913 раствор для инфузий отсутствует 1 бутылка стеклянная 200,000 пачка картонная 1 одна инструкция по медицинскому применению 2 г
3 203914 раствор для инфузий отсутствует 1 бутылка стеклянная 400,000 пачка картонная 1 одна инструкция по медицинскому применению 2 г
4 203915 раствор для инфузий отсутствует 1 бутылка стеклянная 250,000 пачка картонная 1 одна инструкция по медицинскому применению 2 г
5 203916 раствор для инфузий отсутствует 1 бутылка стеклянная 500,000 пачка картонная 1 одна инструкция по медицинскому применению 2 г
6 203917 раствор для инфузий отсутствует 1 контейнер полимерный 100,000   1   2 г
7 203918 раствор для инфузий отсутствует 1 контейнер полимерный 250,000   1   2 г
8 203919 раствор для инфузий отсутствует 1 контейнер полимерный 500,000   1   2 г
9 203920 раствор для инфузий отсутствует 28 бутылка стеклянная 100,000 Коробка картонная 28 инструкции по медицинскому применению 2 г
10 203921 раствор для инфузий отсутствует 28 бутылка стеклянная 200,000 Коробка картонная 28 инструкции по медицинскому применению 2 г
11 203922 раствор для инфузий отсутствует 15 бутылка стеклянная 400,000 Коробка картонная 15 инструкции по медицинскому применению 2 г
12 203923 раствор для инфузий отсутствует 28 бутылка стеклянная 250,000 Коробка картонная 28 инструкции по медицинскому применению 2 г
13 203924 раствор для инфузий отсутствует 15 бутылка стеклянная 500,000 Коробка картонная 15 инструкции по медицинскому применению 2 г
14 203925 раствор для инфузий отсутствует 72 контейнер полимерный 100,000 Коробка картонная 72 инструкции по медицинскому применению 2 г
15 203926 раствор для инфузий отсутствует 34 контейнер полимерный 250,000 Коробка картонная 34 инструкции по медицинскому применению 2 г
16 203927 раствор для инфузий отсутствует 22 контейнер полимерный 500,000 Коробка картонная 22 инструкции по медицинскому применению 2 г

 

 

Представленная информация по лекарственным препаратам предназначена для врачей и работников здравоохранения

Описание активных компонентов препарата

Приведенная информация является обобщающей и не может быть использована для принятия решения о возможности применения конкретного лекарственного препарата.

Международное название: Натрия хлорид

 

Лекарственная форма: порошок для приготовления раствора для инъекций, раствор для инфузий, раствор для инъекций, растворитель для приготовления лекарственных форм для инъекций.

Фармакологическое действие:

Плазмозамещающее средство. Оказывает дезинтоксикационное и регидратирующее действие. Восполняет дефицит Na+ при различных патологических состояниях. 0.9% раствор NaCl изотоничен плазме человека и поэтому быстро выводится из сосудистого русла, лишь временно увеличивая ОЦК (эффективность при кровопотерях и шоке недостаточна). Гипертонические растворы (3-5-10%) при наружной аппликации способствуют выделению гноя, проявляют противомикробную активность, при в/в введении усиливают диурез и восполняют дефицит Na+ и Cl-.

 

Фармакокинетика:

Концентрация Na+ — 142 ммол/л (плазмы) и 145 ммол/л (интерстициальной жидкости), концентрация хлорида — 101 ммол/л (интерстициальной жидкости). Выводится почками.

 

Показания:

0.9% раствор NaCl — большие потери внеклеточной жидкости или недостаточное ее поступление (токсическая диспепсия, холера, диарея, ‘неукротимая’ рвота, обширные ожоги с сильной экссудацией и др.), гипохлоремия и гипонатриемия с обезвоживанием, кишечная непроходимость, интоксикации; промывание ран, глаз, слизистой оболочки полости носа, растворение и разведение ЛС и увлажнение перевязочного материала. Гипертонический раствор — легочное, желудочное и кишечное кровотечение, форсированный диурез (вспомогательный осмотический диуретик), обезвоживание, отравление нитратом серебра, гнойные раны (местно), запоры (ректально).

 

Противопоказания:

Гипернатриемия, ацидоз, гиперхлоремия, гипокалиемия, внеклеточная гипергидратация; циркуляторные нарушения, угрожающие отеком мозга и легких; отек мозга, отек легких, острая ЛЖ недостаточность, сопутствующее назначение ГКС в больших дозах.C осторожностью. Декомпенсированная ХСН, ХПН (олиго- анурия).

 

Режим дозирования:

В/в, капельно; п/к, ректально, местно, наружно. 0.9% раствор NaCl: перед введением раствор нагревают до 36-38 град.С. Доза определяется в зависимости от потери организмом жидкости, Na+ и Cl- и в среднем составляет 1 л/сут. При больших потерях жидкости и выраженной интоксикации возможно введение до 3 л/сут. Скорость введения — 540 мл/ч; при необходимости — скорость введения увеличивают. Детям при выраженном снижении АД на фоне дегидратации (до определения лабораторных параметров) вводят 20-30 мл/кг. В дальнейшем режим дозирования корректируется в зависимости от лабораторных показателей. При длительном введении больших доз 0.9% раствора NaCl необходимо проводить контроль электролитов в плазме и моче. 0.9% раствор NaCl применяют для промывания ран, глаз, слизистой оболочки полости носа, увлажнения перевязочного материала. Гипертонический 10% раствор вводят в/в струйно, в количестве 20 мл; для промывания желудка — 2-5%, в клизмах (100 мл) — 5% раствор. Глазные капли назначают по 1-2 кап в пораженный глаз в дневное время. В клизмах — 100 мл 5% раствора для стимуляции дефекации при запорах или до 3 л/сут 0.9% раствора.

 

Побочные эффекты:

Ацидоз, гипергидратация, гипокалиемия.

 

Особые указания:

Возможно замораживание препарата при условии сохранности герметичности контейнера. Контроль КОС и электролитов.

 

Взаимодействие:

При смешивании с др. ЛС необходимо визуально контролировать совместимость (тем не менее возможна невидимая и терапевтическая несовместимость).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Натрия хлорид (раствор для инфузий 0,9 % 200 мл бутыл.) Эском НПК ОАО, г. Ставрополь Россия

8:00-20:00

Кировградская, 70

366-34-70

30. 00 ₽
09-03-2021 (ЦФИ)

8:00-21:00

Бардина, 48

267-23-02,

31.00 ₽
14-03-2021 (ЦФИ)

08:00-21:00

Амундсена, 64

(343) 223-07-69

31.00 ₽
14-03-2021 (ЦФИ)

08:00-19:00

Бебеля,160

(343) 32-23-777

31.90 ₽
14-03-2021 (ЦФИ)

09:00-21:00

Первомайская, 56

286-11-03

32.00 ₽
13-03-2021 (ЦФИ)

переулок Переходный, д. 9 (круглосуточно)

+7 (343) 385-89-07

32.00 ₽
13-03-2021 (ЦФИ)

09:00 — 20:00

Куйбышева, 78 (скидка 3% ежедневно 10. 00 -13.00) (препараты для косметологии)

(343) 318-24-84

33.00 ₽
13-03-2021 (ЦФИ)

08:00-22:00

ул. Верхняя Пышма, Уральских рабочих, д. 48

+7 (34368) 5-86-98

33.00 ₽
12-03-2021 (ЦФИ)

08:00-21:00

ул. Заводская, д. 12 (возможна доставка)

(343) 242-54-45

36.00 ₽
12-03-2021 (ЦФИ)

08:00-20:00

ул. Московская, д. 49

376-35-54

39.00 ₽
13-03-2021 (ЦФИ)

8:00-20:00

Грибоедова, 25

258-07-01

73.00 ₽
11-03-2021 (ЦФИ)

Пациент умер после инфузии хлорида натрия – журнал Vademecum


Пациент Новоусманской районной больницы в Воронежской области скончался после инфузии лекарственного препарата «Натрия хлорид», иными словами, обычного физраствора производства ставропольского завода НПК «Эском». Еще пятеро пациентов после аналогичной процедуры почувствовали недомогание.  Росздравнадзор приостановил реализацию препарата на территории области, проводится экспертиза его качества.


Как установило надзорное ведомство, с 1 декабря 2017 года мужчина находился на плановом лечении в БУЗ ВО «Новоусманская РБ» (село Новая Усмань). 8 декабря 2017 года после внутривенных вливаний препарата его состояние здоровья ухудшилось (появились общая слабость, тошнота), он был  переведен в реанимационное отделение другой больницы, а 17 января скончался. Аналогичные, но менее выраженные реакции возникли еще у пятерых  пациентов.


В связи с этим препарат, введенный пострадавшим (Натрия хлорид раствор для инфузий 0,9% 200 мл, бутылки (28), коробки картонные (для стационаров) серии 2290317 производства ОАО НПК «Эском»), был отдан на экспертизу, которая еще продолжается. Кроме того, 14 декабря 2017 года воронежский Росздравнадзор приостановил его обращение на территории региона из-за несоответствия по показателю «упаковка».


Ведомство также провело внеплановую проверку медучреждения, по результатам которой были выявлены следующие нарушения: осуществление безлицензионной деятельности, отсутствие необходимого оборудования в терапевтическом отделении,  использование незарегистрированного  медицинского  изделия. «Контрольно-надзорные мероприятия в больнице продлятся до 5 февраля, после чего в отношении БУЗ ВО «Новоусманская РБ» будут приняты меры административного реагирования», – уточнили в Росздравнадзоре.


В сентябре 2017 года Росздравнадзор приостановил реализацию серии препарата «Лидокаин», после инъекции которого два человека скончались от анафилактического шока.


Ставропольский завод НПК «Эском» – крупный производитель инфузионных растворов. В апреле 2017 года на предприятии прошли обыски, вероятно, связанные с конфликтом акционеров.

Поделиться в соц. сетях

Контракт на НАТРИЙ ХЛОРИД (НАТРИЯ ХЛОРИД), РАСТВОР ДЛЯ ИНФУЗИЙ ,% МЛ № (Р N/, ОАО «ФИРМА МЕДПОЛИМЕР», РОССИЯ, ПРОИЗВОДСТВО ОАО «ФИРМА МЕДПОЛИМЕР», РОССИЯ)

1

Натрия хлорид (Натрия хлорид), раствор для инфузий 0,9% 250 мл №1 (Р N003758/01, ОАО «Фирма Медполимер», Россия, производство ОАО «Фирма Медполимер», Россия)

21.20.10.134

шт

24,60 ₽

60000.0

1 476 000,00 ₽

2

Натрия хлорид (Натрия хлорид), раствор для инфузий 0,9% 250 мл №1 (ЛС-001906, ООО «Фармасинтез-Тюмень», Россия, производство ООО «Фармасинтез-Тюмень», Россия)

21. 20.10.134

бут

47,41 ₽

10650.0

504 916,50 ₽

3

Натрия хлорид (Натрия хлорид), раствор для инъекций 0,9% 10 мл №10 (ЛП-001960, АО «Фармасинтез», Россия, производство АО «Фармасинтез», Россия)

21.20.10.134

упак

21,80 ₽

330. 0

7 194,00 ₽

4

Натрия хлорид (Натрия хлорид), раствор для инфузий 0,9% 500 мл №1 (ЛС-001906, ООО «Фармасинтез-Тюмень», Россия, производство ООО «Фармасинтез-Тюмень», Россия)

21.20.10.134

бут

57,93 ₽

1640.0

95 005,20 ₽

5

Натрия хлорид (Натрия хлорид), раствор для инфузий 0,9% 100 мл №1 (Р N001119/01, Научно-производственный концерн «Эском», Россия, производство Научно-производственный концерн «Эском», Россия)

21. 20.10.134

бут

21,39 ₽

51480.0

1 101 157,20 ₽

6

Натрия хлорид (Натрия хлорид), раствор для инфузий 0,9% 100 мл №1 (Р N001119/01, Научно-производственный концерн «Эском», Россия, производство Научно-производственный концерн «Эском», Россия)

21.20.10.134

бут

21,30 ₽

40. 0

852,00 ₽

7

Натрия хлорид (Натрия хлорид), раствор для инфузий 0,9% 500 мл №1 (ЛС-001906, ООО «Фармасинтез-Тюмень», Россия, производство ООО «Фармасинтез-Тюмень», Россия)

21.20.10.134

бут

56,91 ₽

1.0

56,91 ₽

8

Натрия хлорид (Натрия хлорид), раствор для инфузий 0,9% 500 мл №1 (ЛС-001906, ООО «Фармасинтез-Тюмень», Россия, производство ООО «Фармасинтез-Тюмень», Россия)

21. 20.10.134

бут

57,68 ₽

159.0

9 171,12 ₽

9

Натрия хлорид (Натрия хлорид), раствор для инфузий 0,9% 250 мл №1 (ЛП-002485, ООО «Гротекс», Россия, производство ООО «Гротекс», Россия)

21.20.10.134

флак

51,00 ₽

600. 0

30 600,00 ₽

10

Натрия хлорид (Натрия хлорид), раствор для инфузий 0,9% 250 мл №1 (ЛП-002485, ООО «Гротекс», Россия, производство ООО «Гротекс», Россия)

21.20.10.134

флак

51,00 ₽

54400.0

2 774 400,00 ₽

11

Натрия хлорид (Натрия хлорид), раствор для инфузий 0,9% 500 мл №1 (ЛС-001906, ООО «Фармасинтез-Тюмень», Россия, производство ООО «Фармасинтез-Тюмень», Россия)

21. 20.10.134

бут

47,41 ₽

22595.0

1 071 228,95 ₽

НАТРИЯ ХЛОРИД 0,9% 100МЛ. №1 Р-Р Д/ИНФ. /ЭСКОМ/

Инструкция по применению

Описание товара

Прозрачная бесцветная жидкость.

Фармакологическое действие

Оказывает дезинтоксикационное и регидратирующее действие. Восполняет дефицит натрия при различных патологических состояниях организма и временно увеличивает объем жидкости, циркулирующей в сосудах.

Фармакокинетика

Быстро выводится почками без изменений.

Показания к применению

Изотонический раствор натрия хлорида применяют для растворения лекарственных препаратов, а также при больших потерях внеклеточной жидкости или недостаточном ее поступлении (токсическая диспепсия, холера, диарея, неукротимая рвота, обширные ожоги с сильной экссудацией и др.), гипохлоремия и гипонатриемия с обезвоживанием, кишечная непроходимость, интоксикации, для промывания ран, глаз, слизистой оболочки носа, для регионарной перфузии совместно с гепарином, противоопухолевыми и другими лекарственными средствами.

Применение при беременности и в период лактации

Сведения отсутствуют.

Особые указания

При длительном введении больших доз изотонического раствора натрия хлорида необходимо проводить контроль кислотно-основного состояния и электролитов в плазме крови и моче.

При значительном обезвоживании при невозможности внутривенного введения вводят подкожно или ректально.

С осторожностью (Меры предосторожности)

С осторожностью: декомпенсированная хроническая сердечная недостаточность, хпоническая почечная недостаточность (олиго-анурия).

Противопоказания

Гипернатриемия, ацидоз, гиперхлоремия, гипокалиемия, внеклеточная гипергидратация, циркуляторные нарушения, угрожающие отеком мозга и легких, отек мозга, отек легких, острая левожелудочковая недостаточность, сопутствующее назначение глюкокортикостероидов в больших дозах.

Способ применения и дозы

Изотонический раствор натрия хлорида для инфузий вводят внутривенно (обычно капелъяо), подкожно, ректапьно или местно (для промывания ран, глаз, слизистой оболочки полости носа), для увлажнения перевязочного материала.

Перед введением раствор нагревают до 36-38°С. Доза определяется в зависимости от потери организмом жидкости, ионов натрия и хлора — в среднем составляет 1000 мл/сутки. При больших потерях жидкости и выраженной интоксикации возможно введение до 3000, мл/сутки. Скорость введения — 540 мл/ч (180 кал/мин): при необходимости — скорость введения увеличивают.

Детям при выраженном снижении артериального давления на фоне дегидратации (до определения лабораторных параметров) вводят 20-30 мл/кг. В дальнейшем режим дозирования корректируется в зависимости от лабораторных показателей.

Передозировка

не описано

Побочное действие

Введение больших объемов изотонического раствора натрия хлорида может привести к хлоридному ацидозу и гипергидратадии, а также к гипокалиемии.

Состав

Действующее вещество: натрия хлорид — 9 г.

Вспомогательное вещество: вода для инъекций — до 1 л.

Теоретическая осмолярность — 308 мОсм/л.

Взаимодействие с другими препаратами

Совместим с коллоидными гемодинамическими кровезаменителями (взаимное усиление эффекта).

При смешивании с другими лекарственными средствами необходимо визуально контролировать совместимость.

Форма выпуска

Раствор для инфузий 0,9 %.

Условия хранения

При температуре не выше 25°С, в недоступном для детей месте.

В случае изменения окраски препарата или появления взвеси, раствоц не пригоден к употреблению.

Замораживание препарата при условии сохранности герметичности бутылки не является противопоказанием к его применению.

Срок годности от даты изготовления

2 года. Не использовать по истечении срока годности.

Заказать Натрия хлорид 0,9%-400мл в интернет-аптеке

Видное, Лемешко ул, 10
пн-вс 9:00-21:00
+7 495 419-19-57

Видное, Строительная ул, д. 3, пом. 19-25
пн-вс 8:00-20:00
8 (495) 419-24-84

г. Домодедово аэропорт, 2 этаж
пн-вс круглосуточно
8-495-419-12-81

Голиково, Усковский пр-д, 2
пн-вс 9:00-22:00
+7 495 419-15-65

Жуковский, Клубная ул, 4/8
пн-вс 9:00-21:00
+7 495 221-53-88

Москва, Автозаводская ул. , 13/1
пн-пт 08:00-23:00, сб-вс 09:00-22:00
+7 (495)419-24-50

Москва, Живописная ул, 12
пн-пт 8:00-22:00, сб 8:00-21:00, вс 9:00-21:00
+7 495 419-06-22

Москва, Нижняя Красносельская ул, д 35, с 49
пн-пт 9:00-22:00, сб-вс 10:00-22:00
+7 495 419 13 48

Москва, Самора Машела ул, 2А
пн-пт 9:00-22:00, сб-вс 9:00-21:00
+7 495 419-12-51

Ногинск, 1-ая Ильича ул, строение 6/29
пн-вс 9:00-22:00
+7 495 221-53-85

Ногинск, Дмитрия Михайлова ул, 1
пн-вс 9:00-22:00
+7 495 419-06-21

Подольск, Академика Доллежаля ул, 3с2
пн-вс 9:00-21:00
+7 495-419-12-85

Химки, Ленинский пр, 1к1
пн-вс 8:00-21:00
+7 495 419 12 97

Щелково, Богородский мкр, 3
пн-вс 9:00-21:00
+7 495 419-12-54

Структура и конформация натриевой соли Nt-Boc-фенилаланил-пролина (Boc-Phe-Pro · NaCl) и дигидрата Nt-Boc-тирозил-пролина (Boc-Tyr-Pro · 2H 2 O)

  • 2.

    Ashida, T .; Какудо, М .. Бык. Chem. Soc. Jpn.
    1974 , 47 , 1129–1133.

    Артикул

    Google ученый

  • 3.

    Chacko, K.K .; Swaminathan, S .; Veena, K.R., Curr. Sci.
    1983 , 52 (14), 660–663.

    CAS

    Google ученый

  • 4.

    Лиакопулу-Кириакидес, М.; Галарди, Р.Е., Биохимия
    1979 , 18 , 1952–1957.

    Артикул
    CAS

    Google ученый

  • 5.

    Brandl, C.J .; Дебер, C.M., Proc. Natl. Акад. Sci. США
    1986 , 83 , 917–921.

    Артикул
    CAS

    Google ученый

  • 6.

    Оливер Д.W .; Маршалл, Г. В пептидах ; Giralt, E .; Andreu, D., Eds .; Escom: Lieden, , 1991, , стр. 597–599.

    Google ученый

  • 7.

    Milne, P.J .; Оливер, Д. У .; Roos, H. M., J. Crystallogr. Спектроскоп. Res.
    1992 , 22 , 643–649.

    Артикул
    CAS

    Google ученый

  • 8.

    Милн, П.J .; Оливер, Д. У .; Roos, H.M., J. Crystallogr. Спектроскоп. Res.
    1993 , 23 , 449–454.

    Артикул
    CAS

    Google ученый

  • 9.

    Oliver, D.W .; Roos, H.M .; Милн, П.Дж., J. Chem. Кристаллогр.
    1995 , 25 (2), 85–88.

    Артикул
    CAS

    Google ученый

  • 10.

    Шелдрик, Г. SHELX76 . Программа для определения кристаллической структуры; Кембриджский университет: Англия.

  • 11.

    Больница, М .; Courseille, C .; Leroy, F .; Рокес, Б.П., Биополимеры
    1979 , 18 , 1141–1148.

    Артикул
    CAS

    Google ученый

  • 12.

    Benedetti, E .; Ciajolo, M.R .; Maisto, A., Acta Cryst.
    1974 , B30 , 1783–1788.

    Google ученый

  • 13.

    Kartha, G .; Ashida, T .; Kakudo, M, Acta Cryst.
    1974 , B30 , 1861–1866.

    Google ученый

  • 14.

    Kamwaya, M.E .; Oster, O .; Bradaczek, H., Acta Cryst.
    1981 , B37 , 1564–1568.

    CAS

    Google ученый

  • 15.

    Mazza, F .; Lucente, G .; Pinnen, F .; Zanotti, G., Acta Cryst.
    1984 , C40 , 1974–1976.

    CAS

    Google ученый

  • 16.

    Haasnoot, C.A.G .; Де Леу, F.A.A.M .; Де Леу, H.P.M .; Альтона, К. Биополимеры
    1981 , 20 , 1211–1245.

    Артикул
    CAS

    Google ученый

  • 17.

    Каюшина Р.Л .; Вайнштейн Б.К., УФН. Cryst.
    1966 , 10 , 698–706.

    Google ученый

  • 18.

    Szafranek, J .; Palacz, Z .; Грзонка, З., Орг. Масс-спектр.
    1976 , 11 , 920–930.

    Артикул
    CAS

    Google ученый

  • 19.

    Goodman, M .; Mierke, D.F., J. Am. Chem. Soc.
    1989 , 111 (10), 3489–3496.

    Артикул
    CAS

    Google ученый

  • 20.

    Пахлер, К.Г.Р., Spectrochim. Acta
    1964 , 20 , 581–587.

    Артикул
    CAS

    Google ученый

  • 21.

    Ciarkowski, J.; Gdaniec, M .; Kolodziejczyk, A .; Либерек, Б .; Borremans, F.A.M .; Антеунис, M.J.O., Int. J. Peptide Protein Res.
    1990 , 36 , 285–291.

    CAS
    Статья

    Google ученый

  • 22.

    North, A.C.T .; Филлипс, округ Колумбия; Мэтьюз, Ф.С., Acta Crystallogr.
    1968 , разд. А , 24 , 351.

    Google ученый

  • 23.

    Шелдрик, Г. SHELX86 . Программа для решения кристаллических структур; Геттингенский университет, 1986.

  • 24.

    Johnson, C.K. ОРТЕП . Отчет ORNL-3794; Национальная лаборатория Окриджа: TN.

  • 25.

    Международные таблицы для рентгеновской кристаллографии ; Kynoch Press: Бирмингем, 1974, том 4; Д. Т. Кромер; D. Liberman, J. Chem. Phys. 1970 , 4 , 1891.

  • Молекулярный механизм распознавания мишени субтилином, лантиониновым антибиотиком I класса

    РЕЗЮМЕ инфекционные заболевания.Лантиониновые антибиотики, которые до сих пор не используются в качестве терапевтических агентов, в последнее время привлекли значительный научный интерес в качестве моделей для нацеливания и лечения бактериальных инфекций. Мы исследовали действие одного члена этого класса, субтилина, который проницаем для липидных мембран липидом II-зависимым образом и связывает бактопренилпирофосфат, похожий на низин. Роль С- и N-концов в распознавании мишени была исследована in vivo и in vitro с использованием природного сукцинилированного на N-конце субтилина, а также ферментативно усеченных вариантов субтилина.Эксперименты по снижению флюоресценции показывают, что субтилин вызывает утечку через мембраны липидом II-зависимым образом и что N-сукцинилированный субтилин примерно в 75 раз менее активен. С помощью твердотельного ядерного магнитного резонанса показано, что субтилин образует комплексы с изопренилпирофосфатами мембран. Анализы активности in vivo показывают, что N-конец субтилина играет решающую роль в его активности. Сукцинилирование N-конца приводило к 20-кратному снижению его активности, тогда как делеция N-конца Trp полностью отменяла активность.

    Катионный антимикробный пептид субтилин (21, 31), продуцируемый грамположительным штаммом Bacillus subtilis ATCC 6633, относится к семейству лантиониновых антибиотиков (22, 38), которое также включает пищевой консервант низин (E234) (17, 36). Субтилин продуцируется B. subtilis ATCC 6633 и включает два встречающихся в природе типа лантибиотика, субтилин и N-сукцинилированный субтилин (рис. 1), который менее активен (14). Биосинтез лантиониновых антибиотиков включает посттрансляционные модификации синтезированных рибосомами пептидов-предшественников, которые приводят к образованию необычных аминокислот (например,д., лантионин, дегидроаланин и дегидробутирин) (22, 38).

    РИС. 1.

    Структуры субтилина (а) и N-сукцинилированного субтилина (б). Стрелки указывают точки расщепления, в которых образуются фрагменты.

    Субтилин проявляет антимикробную активность в наномолярном диапазоне против широкого спектра грамположительных бактерий. Его антибактериальная активность обусловлена ​​проницаемостью цитоплазматической мембраны чувствительных бактерий (33, 40). Он структурно связан с низином (> 60%) (29), который своим антимикробным действием нацелен на предшественники клеточной стенки липид II (6, 9) и ундекапренилпирофосфат (4) на наружном листке бактериальных мембран.Процесс молекулярного узнавания низином опосредуется связыванием с пирофосфатами этих предшественников (4, 28). Пирофосфаты широко распространены и высоко консервативны среди эубактерий, что делает их подходящими мишенями для противомикробного действия.

    Низин-опосредованное образование пор мембраны происходит после целевого распознавания липида II (9, 12). Процесс происходит быстро, время его начала колеблется от миллисекунд до секунд, а время жизни пор может достигать более 6 с. Формирование пор приводит к быстрому рассеиванию трансмембранного электростатического потенциала и жизненно важных градиентов растворенных веществ (1, 15, 37).Низин, который, как было показано, вызывает латеральное разделение фаз в мембранах (5, 6), рекрутирует липид II в латеральные структуры (25). Нацеливание на бактопренилпирофосфат и вывод его из синтеза пептидогликана в стабильные мембранные комплексы — еще один механизм, с помощью которого низин ингибирует биосинтез клеточной стенки бактерий (4). За взаимодействием между низином и промежуточными продуктами клеточной стенки следует сложная последовательность событий, которая включает ускоренное деление клеток, аберрантный морфогенез и образование мицелл (30).

    Значение нацеливания на бактопренилпирофосфатный фрагмент в липиде II очевидно, поскольку такие биомолекулы имеют решающее значение в сборке пептидогликана. Бактериальный пептидогликан инкапсулирует плазматические мембраны, обеспечивая структурную стабильность и защищая бактерии от осмотических воздействий окружающей среды. Пептидогликан представляет собой динамическую систему, в которой биосинтетическое включение нового пептидогликана и разложение автолизинами тесно связаны и контролируются. Поздние стадии биосинтеза бактериальной клеточной стенки включают интеграцию дисахаридных пентапептидных мономерных единиц из липида II в линейные полисахаридные цепи пептидогликана, трансгликозилирование, за которым следует сшивание линейных полимеров, транспептидация (13, 39, 44) .Эти процессы происходят на внешнем листке бактериальной мембраны и нацелены на ряд антибиотиков, ингибирующих клеточную стенку, которые мешают различным стадиям метаболизма (например, бацитрацин [41], мерсацидин [10-12], ванкомицин [ 2] и пенициллин [43]).

    Здесь мы сообщаем о результатах изучения молекулярного механизма распознавания мишени субтилином. Мы использовали анализ утечки карбоксифлуоресцеина (CF), чтобы исследовать роль липида-предшественника клеточной стенки II в качестве мишени для субтилина, и мы использовали твердотельный ядерный магнитный резонанс (ЯМР) для оценки роли мембранных пирофосфатов в распознавании мишеней.Мы провели ферментативное расщепление пептида, чтобы исследовать участие N-концевого триптофана в сайте узнавания внутри субтилина, который отвечает за его взаимодействие с мишенью.

    МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

    Все химические вещества были аналитической степени чистоты или выше. CF и химотрипсин были приобретены у Sigma. Фосфолипиды, 1,2-диолеоил- sn -глицеро-3-фосфохолин (DOPC) и 1,2-диолеоил- sn -глицеро-3-фосфоглицерин (DOPG), были приобретены у Avanti-Polar Lipids, Inc. .и хранили при -20 ° C в растворе хлороформ-метанол 1: 1.

    Бактериальные штаммы, среды и условия культивирования. Бесплазмидный штамм, продуцирующий субтилин B. subtilis ATCC 6633, выращивали при 30 ° C в модифицированной среде M9 с пируватом в качестве единственного источника углерода (47,9 мМ двухосновного фосфата натрия, 17,2 мМ одноосновного фосфата калия, 8,55 мМ хлорида натрия, 18,7 мМ хлорида аммония, 2 мМ сульфата магния, 0,1 мМ хлорида кальция, 0,02 М пирувата, 0,15 мМ хлорида цинка, 0,2 мМ хлорида железа и 0.27 мМ хлорида марганца).

    Выделение двух вариантов субтилина. Субтилин выделяли из 24-часовой культуры B. subtilis ATCC 6633 следующим образом. Культуры подкисляли до pH 2,5 с использованием 80% фосфорной кислоты, а затем центрифугировали (8000 × г , 20 мин, 12 ° C). Концентрацию хлорида натрия в надосадочной жидкости доводили до 1 М, а pH доводили до 4,0, используя 2,5 М ацетатный буферный раствор.

    Хроматографическая колонка длиной 15 см и диаметром 1,5 см была заполнена 20 мл смолы Tosohaas Toyopearl Butyl-650.Колонку уравновешивали 7 объемами уравновешивающего-промывочного буфера (0,05 М ацетат натрия [pH 4,0] и 1 М хлорид натрия). Супернатант помещали на лед и загружали в колонку.

    Затем колонку промывали 7 объемами промывочного буфера и 2 объемами 0,05 М ацетата натрия (pH 4,0). Наконец, субтилин элюировали 2 объемами буфера 50% ацетонитрил-0,05% трифторуксусной кислоты.

    Различные фракции тестировали методом диффузии в агаре против низин-чувствительного штамма Lactococcus lactis MG1614 (20).Собирали фракции, демонстрирующие антимикробную активность, и субтилин и его природный вариант (14) очищали обращенно-фазовой жидкостной хроматографией под высоким давлением (ВЭЖХ) с использованием колонки C 18 (250 на 10 мм). Используемые растворители представляли собой 0,1% водную трифторуксусную кислоту (растворитель A) и 0,1% трифторуксусную кислоту в 70% водном ацетонитриле (растворитель B). Элюирование выполняли с линейным градиентом от 5 до 100% растворителя B в течение 30 мин, с мониторингом вытекающего потока при 220 нм.Фракции, содержащие субтилин и N-сукцинилированный субтилин, были охарактеризованы с помощью масс-спектрометрии (MS) с лазерной десорбционной ионизацией с использованием матрицы (MALDI-TOF) и затем лиофилизированы.

    Производство и очистка фрагментов субтилина. Сайты расщепления субтилина используемыми протеазами указаны на рис. 1. Субтилин или N-сукцинилированный субтилин (5 мг) растворяли в 15 мл буфера (25 мМ ацетат натрия, 5 мг). мМ трис ацетат, 5 мМ хлорид кальция [pH 7.0]), добавляли 2 мг химотрипсина и реакционную смесь инкубировали при 30 ° C; еще 1 мг химотрипсина добавляли через 24 и 48 часов. Через 72 ч реакцию останавливали подкислением. За ходом реакции расщепления следили с помощью масс-спектрометрии аликвот, полученных через определенные промежутки времени. Желаемые фрагменты очищали из подкисленных реакционных смесей обращенно-фазовой ВЭЖХ. Колонку AC 18 (250 на 10 мм) использовали с градиентом от растворителя A к растворителю B. Элюирование выполняли с линейным градиентом от 5 до 100% растворителя B в течение 30 минут, с мониторингом выходящего потока при 220 нм. .Фракции, содержащие фрагменты субтилина, собирали, характеризовали с помощью MALDI-TOF MS (фиг. 2) и лиофилизировали.

    РИС. 2.

    Масс-спектры субтилина, N-сукцинилированного субтилина и фрагментов субтилина. (A) Субтилин, m / z 3,321 Да; (B) N-сукцинилированный субтилин, m / z 3,421 Да; (C) фрагмент субтилина 1-29, m / z 3010 Да; (D) фрагмент субтилина 2-29, m / z 2,824 Да. Наблюдаемый молекулярный ион при m / z 2,466 Да обусловлен внутренним эталоном, фрагментом 18-39 адренокортикотропного гормона человека.Определения МИК

    . Определения МИК проводили с помощью анализа диффузии в агаре (16, 27, 42) против L. lactis MG1614.

    Синтез и очистка липида II. Синтез и очистку липид-связанного предшественника клеточной стенки проводили, как описано ранее (7). Вкратце, липид II был синтезирован in vitro с использованием мембранных препаратов Micrococcus luteus ATCC 4698. Мембраны выделяли из клеток, обработанных лизоцимом, центрифугированием (40000 × г ), дважды промывали 50 мМ трис-HCl-10 мМ хлоридом магния. (pH 7.5) и хранили в жидком азоте до использования. Аналитический анализ проводили в общем объеме 150 мкл, содержащем от 400 до 800 мкг мембранного белка, 10 нмоль ундекапренилфосфата, 100 нмоль UDP- N -ацетилмурамилпентапептида (UDP-MurNAc-PP) и 100 нмоль UDP. — N -ацетилглюкозамин (UDP-GlcNAc) в 100 мМ Tris-HCl, 5 мМ MgCl 2 (pH 8,0) и 1% (вес / объем) Triton X-100. UDP-MurNAc-PP очищали, как описано ранее (32). Для очистки миллиграммов липида II аналитическая процедура была увеличена в 250 раз.Реакционные смеси инкубировали в течение 1 ч при 30 ° C, и липиды экстрагировали таким же объемом n -бутанол-6 ​​М пиридин-ацетат (2: 1 [об. / Об.]; PH 4,2). Очистку липида II проводили на колонке DEAE-целлюлоза и элюировали линейным градиентом смеси хлороформ-метанол-вода (2: 3: 1 [об. / Об. / Об.]) До хлороформ-метанол-600 мМ бикарбоната аммония (2: 3: 1 [об. / Об. / Об.]). Фракции, содержащие липид II, идентифицировали с помощью тонкослойной хроматографии (пластины с диоксидом кремния 60F254; Merck), используя хлороформ-метанол-вода-аммиак (88: 48: 10: 1) в качестве растворителя (35).Пятна визуализировали с помощью паров йода. Концентрация очищенного липида II определялась как неорганический фосфат после обработки хлорной кислотой (3).

    Приготовление однослойных везикул. Большие однослойные везикулы для экспериментов по оттоку CF были приготовлены путем экструзии через мембраны с фиксированным размером пор (8, 26). Липиды, DOPC-DPOG (молярное соотношение 3: 1) с 0,1 мол.% Липида II или без него (в отношении общего количества фосфолипидов) смешивали в смеси хлороформ-метанол (1: 2 [объем / объем]) и растворителе. был удален роторным испарением.Липидные пленки оставляли под вакуумом (0,1 мбар) на 2 ч для удаления следовых количеств растворителей. Сухие липидные пленки гидратировали в течение 1 ч в 50 мМ CF, 50 мМ хлорида натрия и 10 мМ HEPES (pH 7,4) путем встряхивания. Суспензию липидов замораживали и оттаивали 10 раз, а затем экструдировали через поликарбонатные фильтры с размером пор 400 нм (11 раз). Неинкапсулированный CF удаляли гель-фильтрацией на колонке PD-10, уравновешенной 100 мМ хлорида натрия и 10 мМ буфера HEPES (pH 7,4). Концентрация липидов определялась количественно по неорганическому фосфату (3).

    Анализ утечки CF. Нагруженные CF везикулы разбавляли 100 мМ хлорида натрия и 10 мМ HEPES (pH 7,4) буфером до концентрации, подходящей для анализа на утечку. После добавления пептида увеличение интенсивности флуоресценции измеряли при 515 нм (возбуждение при 490 нм) на спектрофотометре RF-5301 (Shimadzu, Дуйсбург, Германия) при 20 ° C. Вызванная пептидом утечка была зарегистрирована относительно общего количества маркера, высвобожденного после распада везикул, путем добавления 10 мкл 20% Triton X-100.

    ЯМР-эксперименты. Образцы для ЯМР-экспериментов получали совместным растворением ДОФХ и ДОПГ (молярное соотношение 3: 1) и 4% молярного предшественника соответствующей клеточной стенки в смеси хлороформ-метанол (1: 1 [об. / Об.]). Растворитель удаляли в вакууме, и сухие липидные пленки гидратировали в буфере, содержащем субтилин (10 мМ ацетат [pH 5,0]). Многослойные везикулы получали пятикратным замораживанием-оттаиванием между жидким азотом и водяной баней при 50 ° C. Образцы осаждали 30 мин центрифугирования при 19000 × g , и осадок загружали в 4-миллиметровый ротор ЯМР, вращающийся под магическим углом (MAS).

    Кросс-поляризационные MAS-ЯМР (23, 24) эксперименты были выполнены на спектрометре Varian VNMR 400, оснащенном 4-мм датчиком MAS T3 (Varian, Пало-Альто, Калифорния). Одиночный импульс 119 кГц использовался для возбуждения всей ядерной популяции 31 P, а распад свободной индукции был получен при развязке протонов SPINAL 54 кГц (19) с 8-секундной задержкой между импульсами, чтобы минимизировать нагрев образца. Кросс-поляризационные MAS-эксперименты, во время которых за возбуждением протонов на 105 кГц следовало контактное поле 65 кГц на 1 мс и развязка протонов SPINAL на 55 кГц во время сбора данных и задержка между импульсами 8 с, использовались для возбуждения только относительно неподвижных 31 Ядра P.Было усреднено от 256 до 16 384 переходных процессов. Спектры фосфора-31 приведены к 0 ppm для фосфорной кислоты (85%).

    РЕЗУЛЬТАТЫ

    Анализ утечки. Способность субтилина влиять на целостность мембраны была исследована в присутствии липида II. Однослойные везикулы DOPC-DOPG, нагруженные CF, содержащие 0,1 мол.% Целевой молекулы, и везикулы DOPC-DOPG без предшественника клеточной стенки инкубировали с диапазоном концентраций субтилина. Никакой утечки не наблюдалось из везикул без липида II, обработанных либо субтилином, либо N-сукцинилированным субтилином, тогда как сильная утечка наблюдалась из везикул, содержащих липид II.

    Утечка из везикул, содержащих липид II, увеличивается с увеличением концентрации субтилина (рис. 3). Диапазон, в котором субтилин вызывает частичную утечку, довольно узок, что согласуется с образованием одной поры на везикулу, достаточной для полной утечки. Более высокие концентрации N-сукцинилированного субтилина требовались для того, чтобы вызвать утечку (рис. 4), что позволяет предположить, что пептид имеет значительно сниженную порообразующую способность. Для сравнения активности субтилина и N-сукцинилированного субтилина мы рассчитали соотношение между липидом II и пептидом.Значения показали, что N-сукцинилированный субтилин в 75 раз менее активен, чем субтилин в присутствии липида II. На рис. 3 и 4 можно выделить две фазы высвобождения CF. Частичная утечка (примерно 20%) при низких концентрациях субтилина может отражать временную бинарную порцию, которая следует за распознаванием цели и зависит от асимметричного распределения антибиотика на внешней створке мембрана. Более высокие соотношения антибиотик / мишень приводят к полному высвобождению флуорофора, скорее всего, за счет кооперативного образования более стабильных олигомерных бинарных пор.Последний процесс может включать вторичный сайт связывания липида II, как мы наблюдали для низина (4).

    РИС. 3.

    Активность субтилина и фрагментов субтилина (, субтилин; ▴, субтилин 1-29; ▪, субтилин 2-29) против везикул DOPC-DOPG с 0,1 мол.% Липида II. Пептиды вызывают утечку CF из везикул.

    РИС. 4.

    Активность N-сукцинилированного субтилина против везикул DOPC-DOPG с 0,1 мол.% Липида II. Пептиды вызывают утечку CF из везикул.

    Исследование пищеварения.Данные твердотельного ЯМР низина указывают на прямое участие N-конца низина в распознавании мишени (4). Мы исследовали роль N-концевого триптофана в распознавании мишеней субтилином in vitro на основе анализов утечки и in vivo против L. lactis 1614. Химотриптическое расщепление N-сукцинилированного субтилина проводили для удаления N-концевого триптофана и субтилина. обрабатывалась аналогично как контроль. Реакция доходит до завершения в N-сукцинилированном пептиде, но невозможна в нативном субтилине из-за неспособности эндопротеазы обрабатывать N-концевые остатки триптофана.Протеолиз идет медленно и занимает 72 часа. Конечным продуктом реакции с N-сукцинилированным субтилином является фрагмент 2-29, а в реакции субтилина — фрагмент 1-29. Каждый из фрагментов, полученных в результате этих перевариваний, очищали с помощью ВЭЖХ и характеризовали с помощью MALDI-TOF MS.

    Фиг. 3 суммирует эффекты субтилина, усеченного на N-конце и C-конце субтилина 2-29 и усеченного на C-конце субтилина 1-29 на целостность мембран, содержащих липид II. Укорочение С-конца на порядок снижает способность субтилина высвобождать CF из везикул, содержащих липид II, по сравнению со способностью субтилина 1-32 с полным пептидом.Такое снижение активности может быть результатом снижения способности С-конца субтилина 1-29 вставляться в мембрану после распознавания мишени и может указывать на более кооперативный механизм транслокации, при котором требуются более высокие концентрации пептида. Напротив, потеря N-концевого триптофана в субтилине 2-29 полностью препятствовала тому, чтобы пептид разрушал мембранные везикулы в испытанном диапазоне концентраций, что показывает, что N-концевой Trp играет ключевую роль в проницаемости мембраны субтилином.

    Способность субтилина, N-сукцинилированного субтилина и фрагментов субтилина 1-29 и 2-29 ингибировать рост в L. lactis MG1614 оценивали с помощью диско-диффузионных антимикробных анализов. Количественный анализ проводили для определения МИК, как описано ранее (18), и определяли чувствительность L. lactis MG1614 к субтилину, N-сукцинилированному субтилину и фрагментам 1-29 и 2-29 субтилина. Значения ингибирования (т.е. MIC в микрограммах / миллилитр) были следующими: субтилин, 1.13; (N-сукцинил-Trp) субтилин, 19,16; субтилин 1-29, 11,49; и субтилин 2-29, без активности (> 50). МИК субтилина и N-сукцинилированного субтилина составляют соответственно 1 и 19 мкг / мл против L. lactis MG1614, что согласуется с опубликованными значениями (14).

    Обработка субтилина химотрипсином, которая удаляет C-концевые остатки Ile30-Dha31-Lys32 и приводит к усеченному пептиду субтилина 1-29, привела к 10-кратному снижению его активности in vivo по сравнению с субтилином.Анализы на утечку в присутствии субтилина 1-29 показали почти неизменную способность этого фрагмента разрушать липид II-содержащие мембраны. Напротив, усечение N-концевого триптофана, которое происходит во время химотриптического переваривания N-сукцинилированного субтилина в дополнение к потере C-концевых остатков 30-32 и дает фрагмент 2-29, приводит к полной потере активности против L. lactis MG1614.

    Ранее мы сообщали, что пирофосфатный фрагмент играет ключевую роль в распознавании мишени низином (4).В то время как комплексы низин-липид II нарушают двухслойные мембраны (9), целостность мембраны сохраняется в присутствии комплексов между антибиотиком и полиизопренилпирофосфатами. Для обнаружения этих комплексов мы разработали анализ, основанный на твердотельном MAS ЯМР 31 P, который очень чувствителен к изменениям молекулярной подвижности. Мы применили этот метод для исследования взаимодействия субтилина и геранилгеранилпирофосфата в мембранах. Поскольку мы не наблюдали прямого участия изопреноидной цепи в распознавании мишени (4, 7), мы выбрали геранилгеранилпирофосфат, производное с более короткой цепью, чем ундекапренилпирофосфат, в качестве легко доступной молекулы-мишени.

    Твердотельный 31 P MAS ЯМР-спектры высокого разрешения от модельных мембран, состоящих из DOPC-DOPG в молярном соотношении 3: 1 и содержащих 4% геранилгеранилпирофосфата, показаны на рис. 5. В отсутствие субтилина (Фиг. 5A) фосфатный фрагмент обладает высокой степенью свободы движения. Фосфаты ДОФХ и ДОПГ демонстрируют динамически усредненные значения анизотропии химического сдвига, уменьшенные по сравнению с прибл. От 200 ppm неподвижных фосфатов до ~ 40 ppm.

    РИС. 5.

    Спектры ЯМР фосфора-31 липидных бислоев, содержащих геранилгеранилпирофосфат.(A) Спектр получен с использованием одноимпульсного возбуждения с последующей развязкой протонов при 4,7 кГц MAS; (B) спектр мембран, обработанных субтилином и полученный с использованием кросс-поляризации касательной линейной амплитуды с последующим разделением протонов при 5 кГц MAS. Числовая аппроксимация спектра пирофосфата показана под спектром на панели B, чтобы лучше видеть.

    При MAS 5 кГц это видно как одиночные вращающиеся боковые полосы низкой интенсивности. Отсутствие вращательных боковых полос от резонанса при −10 ppm на рис.5А предполагает высокую подвижность в области пирофосфата и эффективную анизотропию химического сдвига, значительно меньшую, чем 40 частей на миллион. Поэтому эксперименты с кросс-поляризацией оказались неэффективными, и использовалось возбуждение одиночным импульсом.

    После добавления субтилина двигательные характеристики пирофосфатов резко изменились, что очень похоже на то, что описано во время действия низина (4). Использовалась кросс-поляризация, в результате чего получилась широкая центральная полоса, заключенная в скобки рядом вращающихся боковых полос (рис.5Б). Интересно, что в отличие от низина, субтилин был гораздо менее способен ограничивать динамику пирофосфата, и наблюдалось меньшее количество боковых полос. Для увеличения относительного вклада неподвижных пирофосфатов было использовано более короткое время перемешивания 1 мс вместо более длительного времени перемешивания от 5 до 10 мс, необходимого для оптимального возбуждения частично подвижных фосфатов в DOPC и DOPG. Это позволило нам выделить спектральный вклад пирофосфатов с низкой фракцией из большого количества фосфатов ДОФХ и ДОПГ.Центральная полоса, связанная с пирофосфатами в комплексе, была значительно шире, чем резкий резонанс, который мы наблюдали от мембран без субтилина, что, скорее всего, указывает на неуникальный способ прикрепления субтилина к пирофосфату.

    ОБСУЖДЕНИЕ

    Субтилин был описан как порообразующий лантибиотик, который вызывает рассеяние трансмембранной протонной движущей силы и высвобождение цитоплазматических растворенных веществ из клеток Staphylococcus simulans и B. subtilis и из мембранных везикул (33).Ранние исследования также показали, что субтилин вызывает ингибирование биосинтеза клеточной стенки in vitro (34). Однако информация о молекулярных детерминантах субтилин-опосредованной проницаемости мембран и роли промежуточных продуктов клеточной стенки недоступна. Сходства с низином позволяют проводить важные сравнения как по функциям, так и по распознаванию целей. Мы используем комбинацию биохимических, микробиологических и физико-химических методов для исследования интерфейса распознавания между субтилином и промежуточными продуктами клеточной стенки, ассоциированными с мембранами.

    Предыдущие исследования показали, что низин в низких концентрациях может вызывать быстрый отток CF из многослойных липосом при добавлении 0,1 мол.% Липида II. В отсутствие липида II на такие липосомы не влияли такие высокие концентрации низина, как 1,25 мкМ (12). Мы проанализировали взаимодействия между субтилином и промежуточными продуктами зрелой клеточной стенки, содержащими пирофосфат, а также влияние переваривания субтилина на его способность вызывать утечку из нагруженных CF везикулами. Мы обнаружили, что субтилин способен обеспечивать проницаемость мембранных везикул, содержащих липид II, в концентрациях, очень близких к тем, при которых наблюдается лизис низина (6, 9).Следуя аналогии с низином, мы предположили, что укорочение С-конца не приведет к значительному изменению активности (15). Действительно, способность субтилина 1-29, лишенного С-концевых остатков Ile30-Dha31-Lys32, разрушать липидные мембраны, содержащие липид II, практически не затрагивалась.

    Прямое участие N-концевого Ile1 низина в распознавании пирофосфата (4) побудило провести исследование ферментативной делеции в субтилине, что было невозможно в низине. Мы успешно удалили N-концевой триптофан и сравнили способность полученного фрагмента субтилина 2-29 со способностью 1-29.Эффект был впечатляющим, и мы не наблюдали разрушающего мембрану действия субтилина 2-29. Даже незначительная модификация пептида, которая наблюдается в природном N-сукцинилированном варианте, привела к заметному ~ 20-кратному снижению литической активности. Эти результаты подчеркивают ключевую роль N-конца в действии субтилина и в распознавании мишеней, как мы видели на низине (4).

    Пористая способность субтилина тесно связана с его структурой. Изучение антимикробной активности фрагментов субтилина подчеркнуло ключевую роль N-концевой аминокислоты субтилина в порообразовании.Фактически, удаление трех последних аминокислот на С-конце влияет на активность лантибиотика, но не влияет на его способность образовывать поры, а модификация первой аминокислоты на N-конце приводит к снижению антимикробной активности. . N-сукцинилированный субтилин имеет МПК в 20 раз выше, чем у субтилина, а фрагмент субтилина 2-29 не проявляет активности. Это снижение антимикробной активности субтилина, которое следует за удалением N-триптофана, указывает на механизм распознавания липида II, который включает образование комплекса между триптофаном и липидом II.

    Наши результаты MAS ЯМР 31 P показывают способность субтилина взаимодействовать с пирофосфатсодержащими промежуточными соединениями в стабильные комплексы (рис. 6). Помимо разрушения мембран, содержащих липид II, это указывает на его роль в качестве ингибитора клеточной стенки. Нацеливание на пирофосфат необходимо для высокой активности субтилина и низина. Этот специфический механизм важен для избирательного нацеливания на бактерии, которые уникальны тем, что представляют производные пирофосфата на внешних поверхностях своих мембран.Напротив, пирофосфаты не обнаруживаются на внешних поверхностях плазматических мембран эукариот.

    РИС. 6.

    Предлагаемый механизм пирофосфат-опосредованного поражения мишеней лантиониновым антибиотиком субтилином. Нарушение мембраны происходит липидом II-опосредованным образом, и синтез клеточной стенки затруднен из-за вовлечения содержащих пирофосфат промежуточных продуктов в комплексы.

    Во время своего действия лантиониновый антибиотик субтилин основан на взаимодействии с мембраносвязанными промежуточными соединениями бактериальной клеточной стенки — липидом II и бактопренилпирофосфатом.Высокая эффективность, возникающая в результате такого опосредованного мишенью действия, может быть связана с его значительно более высокой эффективностью по сравнению с нарушающими мембрану бактерицидными пептидами из защитных систем высших организмов, которые действуют через неспецифические механизмы. Подобно низину, субтилин в присутствии липида II нарушает барьерную функцию липидных бислоев даже при 20 нМ. Способность субтилина вмешиваться в клеточную стенку и ее биосинтетический путь путем взаимодействия с молекулярными промежуточными продуктами убедительно указывает на возможность других антибактериальных эффектов, которые возникают после нарушения мембраны.Они могут включать аберрантный морфогенез и аномальное деление клеток, отслоение клеточной стенки от плазматической мембраны и образование мицелл, как это видно во время действия низина (30).

    Мы исследовали здесь взаимодействия между лантиониновым антибиотиком субтилином и пирофосфатными интермедиатами клеточной стенки с помощью анализов утечки флуоресценции и твердотельной ЯМР-спектроскопии. Мы показали, что субтилин образует комплексы с ассоциированными с мембранами пирофосфат-содержащими интермедиатами клеточной стенки и что он проникает через липидные мембраны липидом II-зависимым образом.Активность модифицированных на N-конце вариантов субтилина оценивали in vivo и in vitro, и мы пришли к выводу, что вовлечение N-конца мишени имеет решающее значение для функции антибиотика. Напротив, удаление трех С-концевых остатков привело к сравнительно небольшому изменению антимикробной активности субтилина и его способности разрушать мембраны. Было показано, что распознавание пирофосфата и вовлечение геранилгеранилпирофосфата в стабильные комплексы происходит в липидных мембранах, что предполагает способность субтилина ингибировать синтез клеточной стенки.

    БЛАГОДАРНОСТИ

    Мы благодарим Никки Хорн, Исследовательский совет по биотехнологиям и биологическим наукам (BBSRC) IFR, Норвич, Великобритания, за предоставленные штаммы бактерий и Алекса Моргана за подготовку иллюстраций. Масс-спектроскопия была проведена отделом синтеза и анализа биополимеров Школы биомедицинских наук Ноттингемского университета.

    Поддержка этого исследования была предоставлена ​​BBSRC Соединенного Королевства в рамках грантов B20039 и BB / C510924 / 1 для B.B. Вклад компании Varian, Inc. в создание прибора для ЯМР признан с благодарностью.

    СНОСКИ

      • Получено 27 июня 2007 г.
      • Возвращено для модификации 31 июля 2007 г.
      • Принято 31 октября 2007 г.
    • Авторское право © Американское общество микробиологии, 2008 г.

      Abee, T., FM Rombouts, J. Hugenholtz, G. Guihard и L. Letellier.
      1994 г.Механизм действия низина-Z против Listeria monocytogenes Scott, выращенного при высоких и низких температурах. Прил. Environ. Microbiol.60 : 1962-1968.

    • 2.↵

      Барна, Дж. К. Дж. И Д. Х. Уильямс.
      1984. Структура и механизм действия гликопептидных антибиотиков группы ванкомицина. Анну. Ред. Microbiol.38 : 339-357.

    • 3.↵

      Бартлетт, Г. Р.
      1959. Анализ фосфора в колоночной хроматографии.J. Biol. Chem. 234 : 466-468.

    • 4.↵

      Bonev, B. B., E. Breukink, E. Swiezewska, B. De Kruijff и A. Watts.
      2004. Нацеливание на внеклеточные пирофосфаты подкрепляет высокую селективность низина. FASEB J.18 : 1862-1869.

    • 5.

      Бонев Б. Б., В. К. Чан, Б. В. Байкрофт, Г. К. К. Робертс и А. Уоттс.
      2000. Взаимодействие лантибиотика низина со смешанными липидными бислоями: исследование P-31 и H-2 ЯМР.Биохимия39 : 11425-11433.

    • 6.↵

      Брейкинк, Э., Б. Б. Бонев, И. Видеманн, Х. Г. Заль, А. Уоттс и Б. де Круидж.
      2001. Специфическое взаимодействие лантибиотика низина с липидом II приводит к высокоэффективному порообразованию. Биофиз. J.80 : 7.

    • 7.↵

      Breukink, E., HE van Heusden, PJ Vollmerhaus, E. Swiezewska, L. Brunner, S. Walker, AJR Heck и B. de Kruijff .
      2003 г.Липид II является внутренним компонентом поры, индуцированной низином в бактериальных мембранах. J. Biol. Chem. 278 : 19898-19903.

    • 8.↵

      Breukink, E., C. van Kraaij, R.A. Demel, R.J. Siezen, O.P. Kuipers, and B. de Kruijff.
      1997. С-концевой участок низина отвечает за начальное взаимодействие низина с мембраной-мишенью. Биохимия 36 : 6968-6976.

    • 9.↵

      Брейкинк, Э., И.Wiedemann, C. van Kraaij, O.P. Kuipers, H.G.Sahl и B. de Kruijff.
      1999. Использование липида-предшественника клеточной стенки II порообразующим пептидным антибиотиком. Science286 : 2361-2364.

    • 10.

      Brotz, H., G. Bierbaum, A. Markus, E. Molitor и H. G. Sahl.
      1995. Механизм действия лантибиотика мерсацидина: ингибирование биосинтеза пептидогликана с помощью нового механизма. Противомикробный. Агенты Chemother.39 : 714-719.

    • 11.

      Brotz, H., G. Bierbaum, P. E. Reynolds и H. G. Sahl.
      1997. Лантибиотик мерсацидин подавляет биосинтез пептидогликана на уровне трансгликозилирования. Евро. J. Biochem. 246 : 193-199.

    • 12.

      Brotz, H., M. Josten, I. Wiedemann, U. Schneider, F. Gotz, G. Bierbaum и H. G. Sahl.
      1998. Роль липид-связанных предшественников пептидогликанов в образовании пор низином, эпидермином и другими лантибиотиками. Мол.Microbiol.30 : 317-327.

    • 13.↵

      Багг, Т. Д. Х. и К. Т. Уолш.
      1992. Внутриклеточные этапы биосинтеза пептидогликанов клеточной стенки бактерий: энзимология, антибиотики и устойчивость к антибиотикам. Nat. Prod. Реп.9 : 199-215.

    • 14.

      Чан, В. К., Б. В. Байкрофт, М. Л. Лейланд, Л. Ю. Лиан и Г. К. К. Робертс.
      1993. Новая посттрансляционная модификация пептидного антибиотика субтилина: выделение и характеристика природного варианта из Bacillus subtilis ATCC 6633.Biochem. J.291 : 23-27.

    • 15.↵

      Чан, В. К., М. Лейланд, Дж. Кларк, Х. М. Додд, Л. Ю. Лиан, М. Дж. Гассон, Б. В. Байкрофт и Г. К. К. Робертс.
      1996. Взаимосвязь между структурой и активностью пептидного антибиотика низина: антибактериальная активность фрагментов низина. FEBS Lett. 390 : 129-132.

    • 16.↵

      Купер, К. Э.
      1955. Теория зон ингибирования антибиотиков в агаризованных средах. Nature176 : 510-511.

    • 17.

      Делвс-Бротон, Дж., П. Блэкберн, Р. Дж. Эванс и Дж. Хугенгольц.
      1996. Применение бактериоцина, низина. Антони ван Левенгук 69 : 193-202.

    • 18.↵

      Finn, R. K.
      1959. Теория агардиффузионных методов биотестирования. Анальный. Chem.31 : 975-977.

    • 19.↵

      Фунг Б.М., Хитрин А.К., Ермолаев К.
      2000. Усовершенствованная широкополосная развязка для жидких кристаллов и твердых тел.J. Magn. Reson.142 : 97-101.

    • 20.↵

      Гассон, М. Дж.
      1983. Плазмидные комплементы Streptococcus lactis, Ncdo-712 и других молочнокислых стрептококков после лечения протопластами. J. Bacteriol. 154 : 1-9.

    • 21.↵

      Гросс, Э., Х. Х. Кильц и Э. Небелин.
      1973. Субтилин В.И. Строение субтилина. Hoppe-Seyler’s Zeitschr. Physiol. Chemie354 : 810-812.

    • 22.↵

      Гудер А., И. Видеманн и Х. Г. Заль.
      2000. Посттрансляционно модифицированные бактериоцины: лантибиотики. Биополимеры 55 : 62-73.

    • 23.↵

      Haeberlen, U., and J. S. Waugh.
      1969. Спин-решеточная релаксация в периодически возмущенных системах. Phys. Rev.185 : 420-425.

    • 24.↵

      Hartmann, S. R., and E. L. Hahn.
      1962. Двойной ядерный резонанс во вращающейся системе отсчета.Phys. Версия 128 : 2042-2045.

    • 25.↵

      Хаспер, Х. Э., Н. Э. Крамер, Дж. Л. Смит, Дж. Д. Хиллман, К. Захария, О. П. Койперс, Б. де Круифф и Э. Брейкинк.
      2006. Альтернативный бактерицидный механизм действия пептидов лантибиотиков, нацеленных на липид II. Science313 : 1636-1637.

    • 26. №

      Хоуп, М. Дж., М. Б. Балли, Г. Уэбб и П. Р. Куллис.
      1985. Производство больших однослойных везикул с помощью процедуры быстрой экструзии: характеристика распределения по размерам, захваченного объема и способности поддерживать мембранный потенциал.Биохим. Биофиз. Acta812 : 55-65.

    • 27.↵

      Housewright, R. D., R. J. Henry, and S. Berkman.
      1948. Микробиологический метод определения субтилина. J. Bacteriol. 55, : , 545-550.

    • 28.↵

      Hsu, S. T. D., E. Breukink, E. Tischenko, M. A. G. Lutters, B. de Kruijff, R. Kaptein, A. Bonvin и N. A. J. van Nuland.
      2004. Комплекс низин-липид II обнаруживает пирофосфатную клетку, которая обеспечивает основу для новых антибиотиков.Nat. Struct. Мол. Biol.11 : 963-967.

    • 29.↵

      Hurst, A.
      1981. Нисин. Adv. Прил. Microbiol.27 : 85-123.

    • 30.↵

      Hyde, A. J., J. Parisot, A. McNichol и B. B. Bonev.
      2006. Изменения морфологии Bacillus , вызванные низином, предполагают парадигму действия антибиотиков. Proc. Natl. Акад. Sci. USA103 : 19896-19901.

    • 31.↵

      Янсен, Э.F. и D. J. Hirschmann.
      1944. Субтилин, антибактериальный продукт Bacillus subtilis : условия культивирования и свойства. Arch. Biochem.4 : 297-304.

    • 32.↵

      Kohlrausch, U., and J. V. Holtje.
      1991. Одностадийная процедура очистки UDP- N -ацетилмурамилпептидных предшественников муреина из Bacillus cereus . FEMS Microbiol. Lett.78 : 253-258.

    • 33.↵

      Кордел, М., F. Schuller и H.G.Sahl.
      1989. Взаимодействие порообразующих пептидных антибиотиков пеп 5, низина и субтилина с липосомами без энергии. FEBS Lett. 244 : 99-102.

    • 34.↵

      Linnett, P. E., and J. L. Strominger.
      1973. Дополнительные антибиотики, ингибиторы синтеза пептидогликана. Противомикробный. Агенты Chemother.4 : 231-236.

    • 35.↵

      Рик, П. Д., Г. Л. Хаббард, М. Китаока, Х. Нагаки, Т.Kinoshita, S. Dowd, V. Simplaceanu и C. Ho.
      1998. Характеристика липида-носителя, участвующего в синтезе общего антигена энтеробактерий (ЭКА), и идентификация нового фосфоглицерида в мутанте Salmonella typhimurium , дефектном по синтезу ЭКА. Гликобиология 8 : 557-567.

    • 36.↵

      Rogers, L.A., and E.O. Whittier.
      1928. Лимитирующие факторы в молочной ферментации. J. Bacteriol. 16, : , 211-229.

    • 37.↵

      Sahl, H.-G.
      1991. Порообразование в бактериальных мембранах катионными лантибиотиками, с. 347-358. В Г. Юнг и Х. Г. Саль (ред.), Низин и новые лантибиотики. ESCOM, Лейден, Нидерланды.

    • 38.↵

      Sahl, H. G., and G. Bierbaum.
      1998. Лантибиотики: биосинтез и биологическая активность уникально модифицированных пептидов из грамположительных бактерий. Анну. Ред. Microbiol. 52 : 41-79.

    • 39.↵

      Scheffers, D. J., and M. G. Pinho.
      2005. Синтез клеточной стенки бактерий: новые выводы из исследований локализации. Microbiol. Мол. Биол. Ред. 69 : 585-590.

    • 40.↵

      Schuller, F., R. Benz, and H.G.Sahl.
      1989. Пептидный антибиотик субтилин действует путем образования потенциал-зависимых пор с множеством состояний в бактериальных и искусственных мембранах. Евро. J. Biochem. 182, : , 181-186.

    • 41.№

      Стоун К. Дж. И Дж. Л. Строминджер.
      1971. Механизм действия бацитрацина: комплексообразование с ионом металла и C55-изопренилпирофосфатом. Proc. Natl. Акад. Sci. USA68 : 3223-3227.

    • 42.↵

      Tagg, J. R., and A. R. McGiven.
      1971. Система анализа бактериоцинов. Прил. Microbiol.21 : 943-950.

    • 43.

      Типпер Д. Дж. И Дж. Л. Строминг.
      1968. Биосинтез пептидогликана клеточных стенок бактерий.12. Ингибирование перекрестного связывания пенициллинами и цефалоспоринами: исследования на Staphylococcus aureus in vivo. J. Biol. Chem. 243 : 3169-3179.

    • 44.↵

      van Heijenoort, J.
      2001. Последние достижения в формировании мономерной единицы бактериального пептидогликана. Nat. Prod. Реп.18 : 503-519.

    • Журнал гематологических и онкологических исследований

      Важность аминокислот в биосинтезе белков и высокоактивных биологических соединений была основной предпосылкой для многочисленных исследований их содержания в жидкостях и тканях организма в самых разнообразных экспериментальных и патологических ситуациях.В промежуточном метаболизме аминокислот и их производных связующую роль играет интеграция основных метаболических потоков 1, 2, 3, 4 . Пул свободных аминокислот представлен богатым набором метаболически и функционально взаимосвязанных соединений, концентрации которых являются регуляторным фактором на многих ключевых этапах метаболизма 5, 6 .

      В связи с вышеизложенным изучение механизмов формирования пула свободных аминокислот in vivo является частью важнейшей проблемы современной биохимии и клинической медицины, связанной с направленной регуляцией метаболических процессов в организме человека биологически активными природными соединениями. .В настоящее время количество пациентов с патологией продолжает расти, при этом метаболические нарушения играют ведущую роль в генезе этих патологических состояний 4, 5, 6 . Наиболее актуальной в данном случае является проблема патогенетической роли нарушений обмена аминокислот при гепатобилиарной патологии, а также оптимизация использования отдельных аминокислот или их искусственных смесей не только для заместительной терапии, но и для таргетная метаболическая коррекция заболеваний печени 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 .Помимо нарушений в цепи реакций углеводного, липидного и белкового обмена, характерных для поражения печени, наблюдается выраженный аминокислотный дисбаланс в физиологических жидкостях и тканях 18, 19, 20 .

      Таким образом, показано, что повышение уровня метионина в крови и снижение его выведения при экзогенных нагрузках с этой аминокислотой четко коррелируют с клиническими проявлениями заболеваний, сопровождающихся нарушением функции печени 21, 22, 23, 24 .Кроме того, в крови пациентов с поражением печени наблюдается снижение концентрации наиболее важного продукта распада метионина, цистеина, и резкое повышение токсичности метионина 25, 26 . Обычно до 10 г S-аденозилметионина ежедневно образуется из метионина в печени человека в реакции S-аденозилсинтетазы. Уменьшение времени его работы, приводящее к истощению пула цистеина, не только усугубляет отрицательный азотистый баланс, развивающийся в результате дисфункции печени, но и предотвращает реакции детоксикации 27, 28, 29 , 30, 31 .Последние, как известно, связаны с процессами трансметилирования, в которых S-аденозилметионин играет роль донора групп CH 3 , и с образованием глутатиона, для синтеза которого необходим цистеин 32–35 .

      Поиск путей нормализации метаболизма серосодержащих аминокислот в последнее десятилетие стал результатом использования препаратов S-аденозилметионина для лечения патологии печени. Было обнаружено, что около половины общего пула метионина у людей катаболизируется в печени, при этом 80% его превращается в S-аденозилметионин.Впоследствии было доказано, что последние метилиты представляют собой не только белки, гистоны, биогенные амины и гормоны, но и фосфолипиды клеточных мембран. Таким образом, S-аденозилметионин способен увеличивать текучесть мембран гепатоцитов. Рекомендуется как добавка в смеси аминокислот для парентерального питания. В настоящее время самый известный коммерческий препарат S-аденозилметионина в Европе 36, 37, 38, 39 .

      Показано, что при патологии, сопровождающейся поражением печени и снижением активности окисления других субстратов, организм может удовлетворить свои энергетические потребности на 30-40% за счет окисления углеводородных аминокислот с разветвленной цепью (BCAA) — валин, лейцин и изолейцин в периферических тканях (основная мышца) и глюконеогенез 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 13, 14, 15, 16 .Активация утилизации BCAA при недостаточном их поступлении в таких ситуациях приводит к снижению их уровня в плазме крови 12, 13, 14, 15, 16 . Кроме того, поскольку печень является основным местом метаболизма ароматических аминокислот (ААА), в этих случаях снижается скорость гидроксилирования фенилаланина и его превращение в тирозин. Коэффициент гидроксилирования (соотношение фенилаланин / тирозин) увеличивается при патологии печени.Нарушения использования BCAA и AAA печенью во время ее патологии привели к использованию молярного отношения APC / AAA для количественной оценки аминокислотного дисбаланса. 41, 42 .

      Таким образом, дисбаланс между печеночной утилизацией BCAA и AAA является одним из признаков его патологии. Пероральный прием смесей BCAA для этих целей увеличивает их уровень при одновременном снижении содержания AAA в плазме крови пациентов с печеночной недостаточностью. В том же исследовании была доказана целесообразность использования BCAA при субклинических формах печеночной энцефалопатии и обосновано их назначение при любых катаболических условиях в послеоперационном периоде, поскольку они стимулируют биосинтез белка в мышцах и печени и ингибируют протеолиз, снижая отрицательный баланс азота 43, 44 .

      Вышеуказанное послужило основой для разработки и использования для парентерального питания в гепатологии специализированных смесей аминокислот, обогащенных BCAA. Теоретически их назначение при патологии печени обосновано катаболической направленностью метаболических процессов, способностью этих аминокислот активировать биосинтез белков и устранять аминокислотный дисбаланс 12, 13, 14, 15, 16 . Результаты клинических испытаний перорального приема BCAA послужили основой для производства таблетированной формы смеси этих аминокислот, которая является очень авторитетной в области создания новых гепатопротекторов Dr.Фальк 45, 46 . Естественным развитием «аминокислотной» коррекции патологии печени явилась разработка ряда узкоспециализированных аминокислот целевого действия, характеризующихся высоким содержанием BCAA и минимумом AAA, метионина и гистидина. В то же время в таких смесях концентрация глицина снижается до 8%, поскольку последняя является одной из аминокислот и действует как тормозящий нейромодулятор в центральной нервной системе, а также активирует в них процессы детоксикации и мочевины. содержание аргинина было увеличено до 13%.Подобные препараты созданы и апробированы в нашей стране (ФО-80 или «гепатамин»). Такие смеси ФО-80 широко применялись за рубежом: Аминостерил-Гепа (Германия), Левамин-Хепа (Финляндия), Нер-ОУ (Япония) 5 .

      Одной из основных задач медикаментозной терапии поражения печени является профилактика печеночной недостаточности и осложняющей ее энцефалопатии. Метаболизм белков и аминокислот при развитии печеночной недостаточности нарушается в первую очередь. В 63% случаев острая печеночная недостаточность сопровождается субклиническими формами печеночной энцефалопатии 48, 49, 50 .В патогенезе последних также ведущее место отводится нарушению обмена аминокислот. Так, при развитии острой печеночной недостаточности отмечается азотемия, повышается содержание аммиака в плазме, а в спинномозговой жидкости — глутамина, что свидетельствует о накоплении аммиака в головном мозге. Наряду с активацией процессов деградации белков в кишечнике и печени ингибируются цикл образования мочевины и катаболизм ААА, и происходит активация разложения ВСАА в мышцах.Повышение концентрации аммиака в головном мозге активирует гликолиз и ингибирует цикл трикарбоновых кислот, вызывая снижение выработки энергии. Вследствие этого в нейронах нарушается образование возбуждающих аминокислот глутамата и аспартата с образованием избытка тормозного нейромодулятора глутамина. Кроме того, это приводит к нарушению синтеза гамма-амиобутирата. В результате изменяется баланс возбуждающих и тормозных аминокислот.Воздействие аммиака на мозг усиливается нейротоксическими продуктами, образующимися при распаде AAA, и активируется производство ложных нейротрансмиттеров. Конечным результатом этих метаболических нарушений является нарушение функции центральной нервной системы с преобладанием в ней процессов торможения. Таким образом, гепатобилиарная патология характеризуется значительными нарушениями промежуточного обмена и изменением содержания свободных аминокислот (особенно серосодержащих, ААА и ВСАА) в плазме крови и печени.Следовательно, изучение аминокислот — перспективное направление современной гепатологии, основанное на представлениях о роли аминокислот и их производных в патогенезе поражения печени и применении лекарственных препаратов при патологии печени.

      Причиной использования таурина при заболеваниях печени была относительно давно установленная способность этого соединения образовывать парные желчные кислоты 49, 51 . Для человека таурин является практически незаменимой аминокислотой, и при длительном парентеральном питании или недостаточном его приеме возникают нарушения конъюгации желчных кислот и всасывания липидов.Поэтому в составе искусственных смесей для детского питания (Семилак, США) или наших смесей Тонус-1 (Беларусь), а также используемых в педиатрической практике аминокислот (Vamin-Lact — Швеция, Levamin-Lact — Финляндия) дополнительно содержится таурин в количествах, отвечающих ежедневным потребностям. В настоящее время показано, что таурин, помимо участия в синтезе парных желчных кислот, является нейротрансмиттером и модулятором в центральной нервной системе, регулятором возбудимости мембран в сердце, агентом, активно влияющим на эндокринную систему. и репродуктивные функции животных, защита клеточных мембран от токсичных веществ.Все это превратило его в ряд эффективных средств воздействия на функциональные системы организма и вызвало вполне оправданный интерес не только биохимиков и физиологов, но и клиницистов к этому естественному метаболиту животного организма. 4% раствор таурина под названием «Тауфон» используется только в виде глазных капель и субконъюнктивальных инъекций в офтальмологии как стимулятор процессов регенерации 2, 12 .

      При изучении особой фармацевтической и биологической активности таурина установлено, что это соединение обладает гепатопротекторными и радиозащитными свойствами.Так, назначаемый в различных дозах и режимах приема таурин увеличивает выживаемость животных, предотвращает угнетение кровяных телец и весовых коэффициентов лимфоидных органов. По противорадиационному действию он не уступает препаратам сравнения гексамину и цистеамину, выгодно отличается их низкой токсичностью и прогнозируемым отсутствием нежелательных для организма побочных реакций, а также противопоказаний к применению. Доказано, что таурин проявляет гепатопротекторные свойства: активирует обменные процессы в печени, повышает ее устойчивость к патогенным воздействиям и активирует восстановление ее функций при различных повреждениях 2, 12, 52, 53, 54 .Таурин малотоксичен, не накапливается в организме, не оказывает раздражающего действия, не влияет на репродуктивную функцию и потомство, не проявляет аллергенных свойств и не оказывает отрицательного воздействия на иммунную систему. При его хроническом назначении изменения морфологических, физиологических и биохимических параметров не являются повреждающими, обратимыми и возвращаются к исходному уровню после отмены препарата в течение 8–10 дней 12 .

      Таким образом, наши усилия были сосредоточены на изучении специфической метаболической активности таурина как регулятора обмена аминокислот, гепатопротекторного и радиозащитного препарата и компонента искусственных смесей аминокислот.В конечном итоге эта часть работы была практически завершена разработкой таблетированной лекарственной формы этого препарата, а в специализированных клиниках завершаются клинические испытания таблеток таурина как гепатопротекторного и радиозащитного средства по конкретным показаниям к применению. В связи с последним особенно важным было изучение механизмов биосинтеза, а также формирования внутриклеточного пула серосодержащих аминокислот и функционально активного пула важнейшего продукта их деградации — таурина 1, 2, 3 .

      Нами показано, что однократное внутрибрюшинное введение таурина в дозе 1/10 LD 50 вызывает повышение концентрации этого соединения в печени и плазме крови крыс и снижение уровня метионина, гликогенной аминогруппы. кислоты, BCAA и AAA. Кроме того, таурин in vitro в концентрациях 10–6–10–7 М увеличивает антирадикальную активность гомогенатов печени, содержание в них фосфатидилхолина, фосфоэтаноламина и снижает уровень этаноламина 6 .Дополнительное введение таурина in vivo увеличивало концентрацию восстановленного глутатиона, КоА, 2-оксоглутарата, соотношение НАД / НАДН, активировало митохондриальные декарбоксилазы и трансаминазы и снижало концентрацию глутаминовой кислоты, соотношение BCAA / AAA, ацетил-CoA / CoA. в печени. Все вышеизложенное доказывает, что увеличение концентрации таурина активирует гликолиз и использование углеродных скелетов аминокислот в цикле трикарбоновых кислот в печени 12 .Метаболические предпосылки, возникающие на фоне повышенного содержания таурина в организме, тем самым доказывают целесообразность включения этого соединения в состав искусственных смесей аминокислот для парентерального питания.

      Статистическая модель, построенная для печени крысы, выявила зависимость уровня BCAA от содержания таурина, что предполагает его влияние на активность глюкозо-аланинового цикла, глюконеогенез и использование этих аминокислот в цикле лимонной кислоты 5 .На основании математических моделей, созданных для печени и плазмы крови, можно предположить, что повышение концентрации таурина в крови или печени при активации его синтеза или на фоне экзогенной нагрузки будет способствовать снижению уровня гликогенного аминокислоты 6, 12 .

      Также были проведены исследования закономерностей формирования пула аминокислот в печени, плазме крови и желчи пациентов на фоне функционально обратимых повреждений гепатобилиарной системы при остром и хроническом холецистите.В наших исследованиях 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 13, 14, 15, 16 , было показано что как острые, так и хронические формы холецистита сопровождаются гипераминоацидемией в основном за счет гликогенных, ароматических и серосодержащих, а также аминокислот и их производных маркеров антитоксической функции печени (мочевины, аммиака, гамма-аминобутирата). Изменения содержания этих соединений были более выражены при хронической форме заболевания, особенно за счет увеличения общего пула серосодержащих аминокислот.Обнаруженная нами зависимость подтвердилась высокой эффективностью использования аминоамина Вамин в клинике. Метаболическая коррекция изменений, вызванных операционной травмой и воспалением желчного пузыря, оказалась эффективной при отсутствии выраженных метаболических, функциональных и морфологических изменений в печени и способствовала снижению частоты послеоперационных осложнений 1, 2, 3 , 4, 5, 6, 58, 59, 60, 61, 62, 63 .

      В печени животных с экспериментальным холестазом наблюдалась выраженная тенденция к увеличению общего запаса свободных аминокислот при почти пятикратном снижении соотношения незаменимых аминокислот к заменимым (НЭ). Характерно, что эти изменения касаются в первую очередь гликогенных аминокислот, нарушение обмена веществ в печени является одним из характерных признаков, возникающих даже на ранних стадиях гепатобилиарной патологии. При обогащении сырья свободными серосодержащими аминокислотами и их производными отчетливо отмечалось трехкратное снижение индекса Фишера (BCAA / AAA) 3 .Дополнительное введение таурина при экспериментальном холестазе оказало нормализующее действие на уровни исследуемых соединений в печени и плазме крови животных. Из результатов, отражающих закономерности формирования пула свободных аминокислот в гепатоцитах контрольных и экспериментальных животных, очевидно, что метаболическая активность гепатоцитов, выделенных из «холестатической» печени, была снижена по отношению к синтезу аминокислот de novo. 5 . В ситуации экспериментального холестаза выявлены общие закономерности формирования аминокислотного дисбаланса на тканевом (печень) и клеточном (изолированные гепатоциты) уровнях и выявлены метаболические предпосылки, обосновывающие целесообразность включения таурина в состав искусственных смесей аминокислот. кислоты для парентерального питания при внепеченочном холестазе 12 .

      Закономерности формирования пула аминокислот при развитой печеночной недостаточности изучены нами на этапах хирургического устранения билиарной гипертензии у 147 больных с подпеченочной желтухой. Аминокислотный дисбаланс в плазме крови этой группы пациентов характеризовался гипераминоацидемией, которая в равной мере была вызвана как NEAA, так и EAA, резким снижением концентрации BCAA и уменьшением соотношения BCAA / AAA. Для плазмы крови характерно резкое повышение концентрации серосодержащих аминокислот или образование парных соединений с желчными кислотами или аминокислотами.Изменение содержания исследуемых соединений в печени из-за ее недостаточности в целом свидетельствует о торможении реакций синтеза аминокислот в печени, их поступления в желчь и снижении активности энтерогепатической рециркуляции 4 . Таким образом, внепеченочный холестаз при развивающейся печеночной недостаточности характеризуется выраженным аминокислотным дисбалансом, который формируется в основном за счет изменения уровней гликогенных и серосодержащих аминокислот. Линейный дискриминантный анализ аминокислотного пула образцов биопсии печени этих пациентов показал, что, несмотря на увеличение содержания предшественников, уровень таурина существенно не отличался от контрольных значений.Очевидно, что в такой ситуации повышения концентрации таурина в печени можно добиться только за счет его экзогенного введения. Математическое моделирование формирования пула свободных аминокислот в печени обосновывает возможность дополнительного экзогенного введения таурина при гепатобилиарной патологии 12 . С первых суток после наложения лапароскопической холецистомии выяснилось, что введение в желчные протоки 60 мл 4% раствора таурина (тауфона), растворенного в 500 мл изотонического раствора натрия хлорида, под давлением водного столба 140–180 мм в сочетании с внутривенным введением 400 мл Полиамина привело к контролируемой декомпрессии, коррекции аминокислотного дисбаланса и значительному уменьшению проявлений печеночной недостаточности 1 .

      Таким образом, на фоне функционально обратимых или морфологических изменений печени, сочетающихся с гепатобилиарной патологией, у человека формируются качественно похожие метаболические нарушения, приводящие к нарушению аминокислотного баланса и увеличению концентрации серосодержащих, ароматических и гликогенных аминокислот. кислоты в печени и плазме крови.

      молекул | Бесплатный полнотекстовый | Производство фурфурола из d-ксилозы и ксилана с использованием стабильного нафиона NR50 и NaCl в двухфазной реакции с помощью микроволнового излучения

      Рисунок 1.
      Влияние температуры реакции на выход фурфурола. Условия реакции: нафион NR50 (два осадка), NaCl (95 мг), d-ксилоза (1,0 ммоль), вода (1 мл), CPME (3 мл) и молекулярная масса, 1 час.

      Рисунок 1.
      Влияние температуры реакции на выход фурфурола. Условия реакции: нафион NR50 (два осадка), NaCl (95 мг), d-ксилоза (1,0 ммоль), вода (1 мл), CPME (3 мл) и молекулярная масса, 1 час.

      Рисунок 2.
      Влияние времени реакции и температуры на выход ( a ) фурфурола и содержание ( b ) ксилозы.Условия реакции: нафион NR50 (2 гранулы), NaCl (95 мг), d-ксилоза (1,0 ммоль), вода (1 мл), CPME (3 мл) и молекулярная масса.

      Рисунок 2.
      Влияние времени реакции и температуры на выход ( a ) фурфурола и содержание ( b ) ксилозы. Условия реакции: нафион NR50 (2 гранулы), NaCl (95 мг), d-ксилоза (1,0 ммоль), вода (1 мл), CPME (3 мл) и молекулярная масса.

      Рисунок 3.
      Влияние объемного отношения вода-CPME на дегидратацию d-ксилозы до фурфурола.Условия реакции: Nafion NR50 (2 гранулы), NaCl (95 мг), d-ксилоза (1,0 ммоль), вода-CPME, MW, 170 ° C и 40 мин.

      Рисунок 3.
      Влияние объемного отношения вода-CPME на дегидратацию d-ксилозы до фурфурола. Условия реакции: Nafion NR50 (2 гранулы), NaCl (95 мг), d-ксилоза (1,0 ммоль), вода-CPME, MW, 170 ° C и 40 мин.

      Рисунок 4.
      Влияние количества NaCl на дегидратацию d-ксилозы до фурфурола. Условия реакции: нафион NR50 (2 гранулы), NaCl, d-ксилоза (1.0 ммоль), вода (1 мл), CPME (3 мл), MW, 170 ° C и 40 мин.

      Рисунок 4.
      Влияние количества NaCl на дегидратацию d-ксилозы до фурфурола. Условия реакции: Nafion NR50 (2 гранулы), NaCl, d-ксилоза (1,0 ммоль), вода (1 мл), CPME (3 мл), MW, 170 ° C и 40 мин.

      Рисунок 5.
      Возможность повторного использования водной фазы, содержащей нафион NR50 и NaCl, для дегидратации d-ксилозы до фурфурола. Условия реакции: нафион NR50 (2 гранулы), NaCl (95 мг), d-ксилоза (1.0 ммоль), вода (1 мл), CPME (3 мл), MW, 170 ° C и 40 мин.

      Рисунок 5.
      Возможность повторного использования водной фазы, содержащей нафион NR50 и NaCl, для дегидратации d-ксилозы до фурфурола. Условия реакции: Nafion NR50 (2 гранулы), NaCl (95 мг), d-ксилоза (1,0 ммоль), вода (1 мл), CPME (3 мл), MW, 170 ° C и 40 мин.

      Рисунок 6.
      FE-SEM-изображения морфологии поверхности Nafion NR50, полученные из: ( a ) нетронутого Nafion; ( b ) реакция без соли; ( c ) с солью после одного каталитического прогона; ( d ) после регенерации в концентрированном растворе HCl (шкала = 50 мкм).

      Рисунок 6.
      FE-SEM-изображения морфологии поверхности Nafion NR50, полученные из: ( a ) нетронутого Nafion; ( b ) реакция без соли; ( c ) с солью после одного каталитического прогона; ( d ) после регенерации в концентрированном растворе HCl (шкала = 50 мкм).

      Рисунок 7.
      Выход фурфурола из ксилана в зависимости от температуры в течение 60 мин. Условия реакции: нафион NR50 (2 гранулы), NaCl (95 мг), ксилан (1.0 ммоль), вода (1 мл), CPME (3 мл), MW, 170 ° C и 60 мин.

      Рисунок 7.
      Выход фурфурола из ксилана в зависимости от температуры в течение 60 мин. Условия реакции: нафион NR50 (2 гранулы), NaCl (95 мг), ксилан (1,0 ммоль), вода (1 мл), CPME (3 мл), молекулярная масса, 170 ° C и 60 мин.

      Публикаций

      Публикации

      Конформационный анализ, часть 8: ЯМР-исследование с изменением конформации производных амиодарона, вызванное лантаноидом.
      Раймонд Дж.Абрахам, Пол Э. Смит, Колетт Делёз и Винсент Ло Гатто.
      Mag. Res. Chem., 25: 147-153, 1987.

      Расчет заряда в молекулярной механике 4: Общий метод для сопряженных систем.
      Раймонд Дж. Абрахам и Пол Э. Смит.
      J. Comp. Chem., 9: 288-297, 1987.

      Расчеты заряда в молекулярной механике 6: Расчет частичных зарядов атомов в основаниях нуклеиновых кислот и электростатический вклад в спаривание оснований ДНК.
      Раймонд Дж. Абрахам и Пол Э.Смит.
      Nucleic Acids Res., 16: 2639-2657, 1988.

      Конформационный анализ, часть 14: ЯМР-анализ индуцированного лантаноида сдвига индан-1-она и норкамфора.
      Рэймонд Дж. Абрахам, Дерек Дж. Чедвик, Пол Э. Смит и Фернандо Санкассан.
      J. Chem. Soc. Perkin Trans. II, 1377-1384, 1989.

      Расчеты заряда в молекулярной механике 7: Приложения к полярным пи-системам, включающим нитро, циано, амино, C = S и тио заместители.
      Раймонд Дж. Абрахам и Пол Э.Смит.
      J. Computer-Aided Mol. Des., 3: 175-187, 1989.

      Конформационный анализ 16: Конформационные свободные энергии в замещенных пиперидинах и солях пиперидиния.
      Раймонд Дж. Абрахам, Крейг Дж. Медфорт и Пол Э. Смит.
      J. Computer-Aided Mol. Des., 5: 205-212, 1991.

      Расчет заряда в молекулярной механике 8: Частичные заряды атомов из классических расчетов.
      Рэймонд Дж. Абрахам, Гай Х. Грант, Ян С. Хаворт и Пол Э. Смит.
      J. Computer-Aided Mol.Des., 5: 2139, 1991.

      Моделирование структуры и динамики цвиттериона бис (пеницилламин) энкефалина.
      Пол Э. Смит, Лием Х. Данг и Б. Монтгомери Петтитт.
      J. Am. Chem. Soc., 113: 67-73, 1991.

      Аспекты дизайна конформационно ограниченных пептидов.
      Пол Э. Смит, Фахад Аль-Обейди и Б. Монтгомери Петтитт.
      Meth. Enzymol., 202: 411-436, 1991.

      Пол Э. Смит и Б. Монтгомери Петтитт.
      Влияние соли на структуру и динамику цвиттериона бис (пеницилламин) энкефалина: исследование с использованием моделирования.
      J. Am. Chem. Soc., 113: 6029-6037, 1991.

      Пол Э. Смит и Б. Монтгомери Петтитт.
      Пептиды в ионных растворах: сравнение методов Эвальда и метода переключения.
      J. Chem. Phys., 95: 8430-8441, 1991.

      .

      Стивен Д. О’Коннор, Пол Э. Смит, Фахад Аль-Обейди и Б. Монтгомери Петтитт.
      Прекращено моделирование туфцина методом молекулярной динамики и предложены циклические аналоги.
      J. Med. Chem., 35: 2870-2881, 1992.

      Пол Э. Смит и Б.Монтгомери Петтитт.
      Популяции аминокислотных боковых цепей в водном и физиологическом растворах: бис-пеницилламин-энкефалин.
      Biopolymers, 32: 1623-1629, 1992.

      Пол Э. Смит, Роджер М. Брунн, Алан Э. Марк и Уилфред Ф. ван Гунстерен.
      Диэлектрические свойства ингибитора трипсина и лизоцима по результатам моделирования молекулярной динамики.
      J. Phys. Chem., 97: 2009-2014, 1993.

      Пол Э. Смит, Б. Монтгомери Петтитт и Мартин Карплюс.
      Моделирование стохастической динамики дипептида аланина с использованием поверхности потенциальной энергии, модифицированной растворителем.
      J. Phys. Chem., 97: 6907-6913, 1993.

      Джон Дж. Таннер, Пол Э. Смит и Курт Л. Краузе.
      Моделирование молекулярной динамики и анализ твердого тела (TLS) аспартат-карбамоилтрансферазы: свидетельство несвязанного состояния R.
      Protein Sci., 2: 927-935, 1993.

      Пол Э. Смит, Гейл Э. Марлоу и Б. Монтгомери Петтитт.
      Пептиды в ионных растворах: имитационное исследование бис-пеницилламинэнкефалина в растворе ацетата натрия.
      J. Am. Chem. Soc., 115: 7493-7498, 1993.

      В. Мохан, Пол Э. Смит и Б. Монтгомери Петтитт.
      Доказательства нового гидратации: сольватация тройных спиралей ДНК.
      J. Am. Chem. Soc., 115: 9297-9298, 1993.

      Пол Э. Смит и Уилфред Ф. ван Гунстерен.
      Вязкость воды SPC и SPC / E при 277K и 300K.
      Chem. Phys. Letts., 215: 315-318, 1993.

      Моделирование молекулярной динамики ионов и воды вокруг триплексной ДНК.
      В. Мохан, Пол Э. Смит и Б. Монтгомери Петтитт.
      Дж.Phys. Chem., 97: 12984-12990, 1993.

      Методы оценки дальнодействующих сил в компьютерном моделировании молекулярных систем.
      Пол Э. Смит и Уилфред Ф. ван Гунстерен.
      В В. Ф. ван Гунстерен, П. К. Вайнер и А. Дж. Уилкинсон, редакторы, Компьютерное моделирование биомолекулярных систем: теоретические и экспериментальные приложения, том 2, страницы 182-212. ESCOM, Лейден, 1993.

      Вычисление свободной энергии на практике: выбор приближений и факторов ограничения точности.
      Уилфред Ф. ван Гунстерен, Томас К. Бейтлер, Франка Браттернали, Пол М. Кинг, Алан Э. Марк и Пол Э. Смит.
      В В. Ф. ван Гунстерен, П. К. Вайнер и А. Дж. Уилкинсон, редакторы, Компьютерное моделирование биомолекулярных систем: теоретические и экспериментальные приложения, том 2, страницы 315-348. ESCOM, Лейден, 1993.

      Прогнозы разностей свободной энергии на основе однократного моделирования начального состояния.
      Пол Э. Смит и Уилфред Ф. ван Гунстерен.
      J. Chem. Phys., 100: 577-585, 1994.

      Стабильные диэлектрические свойства моделей воды с точечным и расширенным точечным зарядом при 277 и 300 К.
      Пол Э. Смит и Уилфред Ф. ван Гунстерен.
      J. Chem. Phys., 100: 3169-3174, 1994.

      .

      Трансляционная и вращательная диффузия белков.
      Пол Э. Смит и Уилфред Ф. ван Гунстерен.
      J. Mol. Biol., 236: 629-636, 1994.

      Свойства сходимости расчетов свободной энергии: комплексы a-циклодекстрина на примере исследования.
      Алан Э.Марк, Стивен П. ван Хелден, Пол Э. Смит, Ламберт Х. М. Янссен и Уилфред Ф. ван Гунстерен.
      J. Am. Chem. Soc., 116: 6293-6302, 1994.

      Моделирующий растворитель в биомолекулярных системах.
      Пол Э. Смит и Б. Монтгомери Петтитт.
      J. Phys. Chem., 98: 9700-9711, 1994.

      Когда важны компоненты свободной энергии?
      Пол Э. Смит и Уилфред Ф. ван Гунстерен.
      J. Phys. Chem., 98: 13735-13740, 1994.

      Внутренняя подвижность основного ингибитора трипсина поджелудочной железы в растворе: сравнение измерений спиновой релаксации ЯМР и моделирования молекулярной динамики.
      > Пол Э. Смит, Рене ван Шайк, Томас Шиперски, Курт Вютрих и Уилфред Ф. ван Гунстерен.
      J. Mol. Biol., 246: 356-365, 1995.

      .

      Наносекундная динамика и структура модельной тройной спирали ДНК в растворе соленой воды.
      Саманта Вирасингхе, Пол Э. Смит, В. Мохан, Юэн-Кит Ченг и Б. Монтгомери Петтитт.
      J. Am. Chem. Soc., 117: 2147-2158, 1995.

      Обобщенный метод поля реакции для моделирования молекулярной динамики.
      Иларио Тирони, Рене Сперб, Пол Э.Смит и Уилфред Ф. ван Гунстерен.
      J. Chem. Phys., 102: 5451-5459, 1995.

      Диэлектрический отклик триплексной ДНК в ионном растворе по результатам моделирования.
      Ликю Янг, Саманта Вирасингхе, Пол Э. Смит и Б. Монтгомери Петтитт.
      Biophysical J., 69: 1519-1527, 1995.

      Компьютерное моделирование движения белков.
      Уилфред Ф. ван Гунстерен, Филипп Х. Хуэненбергер, Алан Э. Марк, Пол Э. Смит и Иларио Г. Тирони.
      Comput. Phys. Comm., 91: 305-319, 1995.

      Эффективные электростатические расчеты Эвальда для больших систем.
      > Пол Э. Смит и Б. Монтгомери Петтитт.
      Comput. Phys. Comm., 91: 339-344, 1995.

      Влияние поля реакции на моделируемые свойства жидкой воды.
      Пол Э. Смит и Уилфред Ф. ван Гунстерен.
      Мол. Моделирование, 15: 233-245, 1995.

      Структура и стабильность модели тройной спирали ДНК py.pu.pu с несоответствием GC-T путем моделирования.
      Саманта Вирасингхе, Пол Э. Смит и Б.Монтгомери Петтитт.
      Biochemistry, 34: 16269-16278, 1995.

      Артефакты Эвальда в моделировании молекулярной динамики жидкого состояния.
      Пол Э. Смит и Б. Монтгомери Петтитт.
      J. Chem. Phys., 105: 4289-4293, 1996.

      Простое двумерное представление общих вторичных структурных элементов полипептидов и белков.
      Пол Э. Смит, Херб Д. Блатт и Б. Монтгомери Петтитт.
      Белки: структура, функция и генетика, 27: 227-234, 1997.

      О наличии вращательных артефактов Эвальда в равновесии и динамических свойствах цвиттерионного тетрапептида в водном растворе.
      Пол Э. Смит, Херб Д. Блатт и Б. Монтгомери Петтитт.
      J. Phys. Chem. B, 101: 3886-3890, 1997.

      Экологически зависимые конформационные предпочтения пептидов
      Пол Э. Смит, Херб Д. Блатт и Б. Монтгомери Петтитт.
      J. Am. Chem. Soc., 119: 8714-8715, 1997.

      Эффекты протонирования на равновесные и динамические свойства тетрапептида аланина.
      Херб Д. Блатт, Пол Э. Смит и Б. Монтгомери Петтитт.
      J. Phys. Chem. В, 101: 7628-7634, 1997.

      Сравнение смоделированной и экспериментально определенной динамики для варианта ДНК-связывающего домена Lacl, NLac-P.
      Лискин Суинт-Круз, Кэтлин С. Мэтьюз, Пол Э. Смит и Б. Монтгомери Петтитт.
      Biophysical J., 74: 413-421, 1998.

      Обзор книги Джерри Гудисмана «Статистическая механика для химиков».
      Пол Э. Смит.
      J. Am. Chem. Soc., 120: 4055-4056, 1998.

      Компьютерное моделирование эффектов сорастворителей на гидрофобную гидратацию.
      Пол Э.Смит.
      J. Phys. Chem. В, 103: 525-534, 1999.

      Сравнение потенциалов средней силы для тетрапептида аланина между теорией интегральных уравнений и моделированием.
      Нинад В. Прабху, Джон С. Перкинс, Херб Д. Блатт, Пол Э. Смит и Б. Монтгомери Петтитт.
      Biophys. Chem., 78: 113-126, 1999.

      Поверхность свободной энергии дипептида аланина в растворе.
      Пол Э. Смит.
      J. Chem. Phys., 111: 5568-5579, 1999.

      Моделирование молекулярной динамики никотинамидадениндинуклеотида (NAD +).
      Пол Э. Смит и Джон Дж. Таннер.
      J. Am. Chem. Soc., 121: 8637-8644, 1999.

      Конформации никотинамидадениндинуклеотида (НАД +) в различных средах.
      Пол Э. Смит и Джон Дж. Таннер.
      J. Mol. Признание, 13: 27-34, 2000.

      Молекулярно-динамическое моделирование свойств растворов сорастворителей.
      Раджаппа Читра и Пол Э. Смит.
      J. Phys. Chem. В, 104: 5854-5864, 2000.

      Время пребывания молекул воды в сайтах гидратации миоглобина.
      Владимир А. Макаров, Б. Ким Эндрюс, Пол Э. Смит и Б. Монтгомери Петтитт.
      Biophysical J., 79: 2966-2974, 2000.

      Свойства смесей 2,2,2-трифторэтанола и воды.
      Раджаппа Читра и Пол Э. Смит.
      J. Chem. Phys., 114: 426-435, 2001.

      Сравнение свойств смесей 2,2,2-трифторэтанол и 2,2,2-трифторэтанол / вода с использованием различных силовых полей.
      Раджаппа Читра и Пол Э. Смит.
      J. Chem. Phys., 115: 5521-5530, 2001.

      Предпочтительные взаимодействия сорастворителей с гидрофобными растворенными веществами.
      Раджаппа Читра и Пол Э. Смит.
      J. Phys. Chem. В, 105: 11513-11522, 2001.

      Молекулярные ассоциации в растворе: анализ Кирквуда-Баффа хлорида натрия, сульфата аммония, хлорида гуанидиния, мочевины и 2,2,2-трифторэтанола в воде.
      Раджаппа Читра и Пол Э. Смит.
      J. Phys. Chem. В, 106: 1491-1500, 2002.

      Конформационный анализ лейцин-энкефалина в зависимости от pH.
      Махалакшми Абури и Пол Э. Смит.
      Biopolymers, 64: 177-188, 2002.

      Структурно консервативная молекула воды в динуклеотидсвязывающих доменах Россмана.
      Кристофер А. Боттомс, Пол Э. Смит и Джон Дж. Таннер.
      Protein Sci., 11: 2125-2137, 2002.

      Влияние внутренних молекул воды на структуру и динамику ингибитора химотрипсина 2.
      Хунсин Лей и Пол Э. Смит.
      J. Phys. Chem. В, 107: 1396-1402, 2003.

      Образование полостей и предпочтительные взаимодействия в растворах мочевины: Зависимость от агрегации мочевины.
      Саманта Вирасингхе и Пол Э. Смит.
      J. Chem. Phys., 118: 5901-5910, 2003.

      Силовое поле Кирквуда-Баффа для смесей мочевины и воды.
      Саманта Вирасингхе и Пол Э. Смит.
      J. Phys. Chem. В, 107: 3891-3898, 2003.

      Силовое поле Кирквуда-Баффа для смесей ацетона и воды.
      Саманта Вирасингхе и Пол Э. Смит.
      J. Chem. Phys., 118: 10663-10670, 2003.

      Силовое поле, полученное Кирквудом-Баффом для хлорида натрия в воде.
      Саманта Вирасингхе и Пол Э. Смит.
      J. Chem. Phys., 119: 11342-11349, 2003.

      .

      Роль развернутого состояния в устойчивости шпильки.
      Хунсин Лэй и Пол Э. Смит.
      Biophysical J., 85: 3513-3520, 2003.

      Комбинированное моделирование и подход Кирквуда-Баффа для количественной оценки эффектов сорастворителей на конформационные предпочтения пептидов в растворе.
      Махалакшми Абури и Пол Э. Смит.
      J. Phys. Chem. В, 108: 7382-7388, 2004.

      Силовое поле Кирквуда-Баффа для моделирования водных растворов хлорида гуанидиния.
      Саманта Вирасингхе и Пол Э. Смит.
      J. Chem. Phys., 121: 2180-2186, 2004.

      .

      Моделирование и имитация дельта-опиоидного рецептора человека.
      Махалакшми Абури и Пол Э. Смит.
      Protein Science, 13: 1997-2008, 2004.

      Модель локального выравнивания химического потенциала для эффектов сорастворителей на биомолекулярные равновесия.
      Пол Э. Смит.
      J. Phys. Chem. В, 108: 16271-16278, 2004.

      Взаимодействие сорастворителей с биомолекулами: Связь данных компьютерного моделирования с экспериментальными термодинамическими данными.
      Пол Э. Смит.
      J. Phys. Chem. В, 108: 18716-18724, 2004.

      Объем белка изменяется при денатурации сорастворителя.
      Пол Э. Смит.
      Biophys. Chem., 113: 299-302, 2005.

      Силовое поле Кирквуда-Баффа для метанола и водных растворов метанола.
      Саманта Вирасингхе и Пол Э. Смит.
      J. Phys. Chem. В, 109: 15080-15086, 2005.

      Структура ЯМР и динамические исследования анион-связывающего каналообразующего гептапептида.
      Габриэль А.Кук, Роберт Паевски, Махалакшми Абури, Пол Э. Смит, Ом Пракаш, Джон М. Томич и Джордж В. Гокель.
      J. Am. Chem. Soc., 128: 1633-1638, 2006.

      Данные о равновесном диализе и взаимосвязи между параметрами предпочтительного взаимодействия в биологических системах в терминах интегралов Кирквуда-Баффа.
      Пол Э. Смит.
      J. Phys. Chem. В, 110: 2862-2868, 2006.

      Силовое поле, производное Кирквуда-Баффа для амидов.
      Мёншим Кан и Пол Э. Смит.
      J. Comput.Chem., 27: 1477-1485, 2006.

      Производные химического потенциала и предпочтительные параметры взаимодействия в биологических системах из теории Кирквуда-Баффа. <
      Пол Э. Смит.
      Biophysical J., 91: 849-856, 2006.

      Предпочтительные параметры взаимодействия в биологических системах из теории Кирквуда-Баффа и компьютерного моделирования.
      Мёншим Кан и Пол Э. Смит.
      Уравнение жидкой фазы, 256: 14-19, 2007.

      Моделирование поверхностного натяжения обычных водных моделей.
      Фен Чен и Пол Э.Смит.
      J. Chem. Физ., 126: 221101, 2007.

      Недавние приложения теории Кирквуда-Баффа к биологическим системам.
      Вероника Пирс, Мёншим Кан, Махалакшми Абури, Саманта Вирасингхе и Пол Э. Смит.
      Cell Biochem. Биофиз., 50: 1-22, 2008.

      Сборки наночастиц MspA Porin-Gold: усиленное связывание посредством контролируемой мутации цистеина.
      Радж Кумар Дани, Мёншим Канг, Маусам Калита, Пол Э. Смит, Стефан Х. Босманн и Виктор Чикан.
      Nano Letts., 8: 1229-1236, 2008.

      Теория и компьютерное моделирование влияния растворенных веществ на поверхностное натяжение жидкостей.
      Фен Чен и Пол Э. Смит.
      J. Phys. Chem. B, 2008, в печати.

      К теории растворимости в смешанных растворителях.
      Пол Э. Смит и Роберт М. Мазо.
      J. Phys. Chem. В, 112: 7875-7884, 2008.

      Теория Кирквуда-Баффа четырех и более компонентов смесей.
      Мёншим Кан и Пол Э. Смит.
      J. Chem. Физ., 128: 244511, 2008.

      Стереохимическая инверсия как путь к улучшению биофизических свойств терапевтических пептидов на примере глюкагона

    • 1.

      Норден, Б. Асимметрия жизни. J. Mol. Evol. 11 , 313–332 (1978).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 2.

      Weber, A. L. & Miller, S. L. Причина появления двадцати кодируемых аминокислотных белков белка. J. Mol. Evol. 17 , 273–284 (1981).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 3.

      Julg, A. in Molecules in Physics, Chemistry, and Biology. Разделы молекулярной организации и инженерии . Vol. 4 (ред. Маруани, Дж.) 33–52 (Springer, Dordrecht, 1989).

    • 4.

      Крейл, Г. D-аминокислоты в пептидах животных. Annu. Rev. Biochem. 66 , 337–345 (1997).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 5.

      Soyez, D., Toullec, J. Y., Ollivaux, C. & Geraud, G. Изомеризация аминокислот L в D в пептидном гормоне является поздним посттрансляционным событием, происходящим в специализированных нейросекреторных клетках. J. Biol. Chem. 275 , 37870–37875 (2000).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 6.

      Верле М. и Бернкоп-Шнерч А. Стратегии улучшения периода полужизни в плазме пептидных и белковых препаратов. Аминокислоты 30 , 351–367 (2006).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 7.

      Морли С. Дж. Модуляция действия регуляторных пептидов путем структурной модификации. Trends Pharmacol. Sci. 1 , 463–468 (1980).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 8.

      Zhou, N. et al. Изучение стереохимии распознавания CXCR4-пептида и ингибирования проникновения ВИЧ-1 с помощью D-пептидов, полученных из хемокинов. J. Biol. Chem. 277 , 17476–17485 (2002).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 9.

      McKee, R. L. et al. Рецепторное связывание и аденилатциклазная активность аналогов глюкагона, модифицированных в N-концевой области. Биохимия 25 , 1650–1656 (1986).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 10.

      Спатола, А.F. в Химия и биохимия аминокислот, пептидов и белков . Vol. 7 (ред. Вайнштейн, Б.) 267–358 (Марсель Деккер, Нью-Йорк, 1983).

    • 11.

      Liebmann, C. et al. Аффинность связывания с опиатным рецептором некоторых аналогов бета-азоморфина, замещенных D-аминокислотой. Пептиды 7 , 195–199 (1986).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 12.

      Heck, S.D. et al. Функциональные последствия посттрансляционной изомеризации Ser46 в токсине кальциевых каналов. Наука 266 , 1065–1068 (1994).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 13.

      Dawson, D. W. et al. Три различных замены D-аминокислот придают сильную антиангиогенную активность неактивному пептиду, полученному из повтора тромбоспондина-1 типа 1. Мол. Pharmacol. 55 , 332–338 (1999).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 14.

      Robberecht, P. et al. Захват рецепторов и активация аденилатциклазы в мембранах печени и сердца крыс 10 аналогами глюкагона, модифицированными в положениях 2, 3, 4, 25, 27 и / или 29. Regul. Pept. 21 , 117–128 (1988).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 15.

      Wiśniewski, K. et al. Синтез и фармакологическая характеристика новых аналогов глюкагоноподобного пептида-2 (GLP-2) с низким системным клиренсом. J. Med. Chem. 59 , 3129–3139 (2016).

      Артикул

      Google ученый

    • 16.

      Tam, J. P., et al. Системный подход к изучению структуры-активности трансформирующего фактора роста α. Пептид: химия, структура и биология. В материалах Proceeding 11th American Peptide Symposium (ред. Ривье, Дж. Э. и Маршалл Г. Р.) 75–77 (ESCOM, Leiden, 1990).

    • 17.

      Там, Дж.П., Лю, В., Чжан, Ж.-В., Галантина, М., Кастильоне Р. Сканирование эндотелина D-аминокислот и аланина: подход к изучению промежуточных продуктов рефолдинга. Пептид: химия, структура и биология. В Протоколах 11-го Американского симпозиума по пептидам (ред. Ривье, Дж. Э. и Маршалл Г. Р.) 160–163 (ESCOM, Leiden, 1990).

    • 18.

      Cunningham, B.C. & Wells, J. A. Картирование эпитопа с высоким разрешением взаимодействия hGH-рецептора с помощью мутагенеза со сканированием аланина. Science 244 , 1081–1085 (1989).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 19.

      Прево М., Вентонген П. и Вэлбрук М. Идентификация ключевых остатков для связывания глюкагона с N-концевым доменом его рецептора: сканирование аланина и исследование моделирования. Horm. Метаб. Res. 44 , 804–809 (2012).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 20.

      Peeters, T. L. et al. D-аминокислоты и аланин сканирование биоактивной части мотилина свиньи. Пептиды 13 , 1103–1107 (1992).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 21.

      Simon, M. D. et al. Сканирование D-аминокислот двух небольших белков. J. Am. Chem. Soc. 138 , 12099–12111 (2016).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 22.

      Чжоу, Н. Е., Монера, О. Д., Кей, К. М. и Ходжес, Р. С. Альфа-спиральная склонность аминокислот на гидрофобной поверхности амфипатической α-спирали. Белковый пепт. Lett. 1 , 114–119 (1994).

      CAS

      Google ученый

    • 23.

      Чен, Ю., Мант, К. Т. и Ходжес, Р. С. Определение коэффициентов стереохимической стабильности боковых цепей аминокислот в амфипатической α-спирали. J. Pept. Res. 59 , 18–33 (2002).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 24.

      Janek, K. et al. Изучение конформационного перехода Aβ (1-42) с использованием аналогов замены D-аминокислоты. Биохимия 40 , 5457–5463 (2001).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 25.

      Wadhwani, P. et al. Использование стерически рестриктивной аминокислоты в качестве метки ЯМР 19 F для мониторинга и контроля агрегации пептидов в мембранах. J. Am. Chem. Soc. 130 , 16515–16517 (2008).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 26.

      Wadhwani, P. et al. Стереохимический эффект на агрегацию и биологические свойства фибриллообразующего пептида KIGAKI 3 в мембране. Phys. Chem. Chem. Phys. 15 , 8962–8971 (2013).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 27.

      Унгер, Р. Х. и Орчи, Л. Физиология и патофизиология глюкагона. Physiol. Ред. 56 , 778–826 (1976).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 28.

      Habegger, K. M. et al. Пересмотр метаболических действий глюкагона. Nat. Rev. Endocrinol. 6 , 689–697 (2010).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 29.

      Hruby, V.J. Исследования структуры, конформации и активности глюкагона и полусинтетических аналогов глюкагона. Мол. Клетка. Biochem. 44 , 49–64 (1982).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 30.

      Мерфи, У. А., Кой, Д. Х. и Ланс, В. А. Суперактивные амидированные СООН-концевые аналоги глюкагона без метионина или триптофана. Пептиды 7 , 69–74 (1986).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 31.

      Унсон, К. Г. и Меррифилд, Р. Б. Идентификация существенного серинового остатка в глюкагоне: значение для триады сайтов активности. Proc. Natl. Акад. Sci. США 91 , 454–458 (1994).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 32.

      Unson, C. G., Wu, C. R., Fitzpatrick, K. J. & Merrifield, R. B. Аналоги глюкагона с множественной заменой. Молекулярная основа дизайна антагонистов. Дж.Биол. Chem. 269 , 12548–12551 (1994).

      CAS
      PubMed

      Google ученый

    • 33.

      Strum., N. S. et al. Исследования структуры и активности гидрофобных аминокислотных замен в положениях 9, 11 и 16 глюкагона. J. Pept. Res. 49 , 293–299 (1997).

      Артикул

      Google ученый

    • 34.

      Unson, C.G., Wu, C.R., Cheung, C.П. и Меррифилд, Р. Б. Положительно заряженные остатки в положениях 12, 17 и 18 глюкагона обеспечивают максимальную биологическую активность. J. Biol. Chem. 273 , 10308–10312 (1998).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 35.

      Unson, CG, Gurzenda, EM, Iwasa, K. & Merrfield, RB Антагонисты глюкагона: вклад в связывание и активность аминоконцевой последовательности 1-5, положения 12 и предполагаемого сегмента α-спирали 19 -27. J. Biol. Chem. 264 , 789–794 (1989).

      CAS
      PubMed

      Google ученый

    • 36.

      Onoue, S. et al. Неправильное обращение с терапевтическим пептидом глюкагоном приводит к образованию цитотоксических амилоидогенных фибрилл. Pharm. Res. 21 , 1274–1283 (2004).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 37.

      Pedersen, J. S. et al. Меняющееся лицо фибрилляции глюкагона: структурный полиморфизм и конформационный импринтинг. J. Mol. Биол. 355 , 501–523 (2006).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 38.

      Джоши, А. Б., Рус, Э. и Кирш, Л. Е. Пути распада глюкагона в кислых растворах. Внутр. J. Pharm. 203 , 115–125 (2000).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 39.

      Джоши, А. Б., Савай, М., Кирни, В.Р. и Кирш, Л. Е. Исследования механизма расщепления аспарагиновой кислоты и дезамидирования глутамина при кислотной деградации глюкагона. J. Pharm. Sci. 94 , 1912–1927 (2005).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 40.

      Chabenne, J. et al. Химически стабилизированный аналог глюкагона для немедленного лечения опасной для жизни гипогликемии. Мол. Метаб. 3 , 293–300 (2014).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 41.

      Ward, W. K. et al. Оценка in vitro и in vivo нативного глюкагона и аналога глюкагона (MAR-D28) во время старения: отсутствие цитотоксичности и сохранение гипергликемического эффекта. J. Diabetes Sci. Technol. 4 , 1311–1321 (2010).

      Артикул

      Google ученый

    • 42.

      Чабенн, Дж. Р., Ди Марчи, М. А., Гельфанов, В. М. и Ди Марчи, Р. Д. Оптимизация нативной последовательности глюкагона для медицинских целей. J. Diabetes Sci. Technol. 4 , 1322–1331 (2010).

      Артикул

      Google ученый

    • 43.

      Mroz, P. A. et al. Пиридил-аланин как гидрофильный ароматический элемент в оптимизации структуры пептидов. J. Med. Chem. 59 , 8061–8067 (2016).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 44.

      Mroz, P. A., Perez-Tilve, D., Лю, Ф., Майер, Дж. П. и Ди Марчи, Р. Д. Нативный дизайн растворимых, устойчивых к агрегации биоактивных пептидов: химическая оценка глюкагона человека. ACS Chem. Биол. 11 , 3412–3420 (2016).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 45.

      Роббинс, К. Дж., Лю, Г., Селмани, В. и Лазо, Н. Д. Конформационный анализ тиофлавина Т, связанного с поверхностью амилоидных фибрилл. Langmuir 28 , 16490–16495 (2012).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 46.

      Groenning, M. et al. Исследование связывания тиофлавина Т с полостями, богатыми бета-слоями, и полостями, не являющимися бета-слоями. J. Struct. Биол. 158 , 358–369 (2007).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 47.

      Рол, К. А. и Болдуин, Р. Л. Сравнение NH-обмена и кругового дихроизма как методов измерения параметров перехода спираль-клубок в пептидах. Биохимия 36 , 8435–8442 (1997).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 48.

      Эль-Хатиб, Ф. Х., Рассел, С. Дж., Натан, Д. М., Сазерлин, Р. Г. и Дамиано, Е. Р. Бигормональная искусственная поджелудочная железа с замкнутым контуром для лечения диабета 1 типа. Sci. Пер. Med. 2 , 27ра27 (2010).

      Артикул

      Google ученый

    • 49.

      Бахтиани, П. А., Чжао, Л. М., Эль Юсеф, Дж., Касл, Дж. Р. и Уорд, У. К. Обзор технологий искусственной поджелудочной железы с акцентом на бигормональную терапию. Диабет, ожирение. Метаб. 15 , 1065–1070 (2013).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 50.

      Болли, Г. Б., Ди Марчи, Р. Д., Парк, Г. Д., Прамминг, С. и Койвисто, В. А. Аналоги инсулина и их потенциал в лечении сахарного диабета. Диабетология 42 , 1151–1167 (1999).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 51.

      Чжан Ф., Чен Ю., Хейман М. и Ди Марчи, Р. Д. Лептин: структура, функции и биология. Витам. Horm. 71 , 345–372 (2015).

      Артикул

      Google ученый

    • 52.

      Finan, B. et al. Химическая гибридизация глюкагона и гормона щитовидной железы оптимизирует терапевтическое воздействие на нарушение обмена веществ. Cell 167 , 843–857 (2016).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 53.

      Zhang, H. et al. Структура рецептора глюкагона в комплексе с аналогом глюкагона. Природа 553 , 106–110 (2018).

      CAS
      Статья

      Google ученый

    • 54.

      Доусон, Р. М. К., Эллиот, Д. К., Эллиот, В. Х. и Джонс, К. М. Данные для биохимических исследований 3-е изд. (Oxford Science Publication, Oxford, 1986).

    • Солевой сектор — SLMoTIT

      Хлорид натрия, также известный как соль, поваренная соль или поваренная соль, является важным продуктом во всех странах мира, включая Сомалиленд. Соль добавляется в пищу либо производителем продуктов питания, либо потребителем,

      в качестве усилителя вкуса, консерванта, связующего вещества, добавки, регулирующей ферментацию, агента, регулирующего текстуру, и проявителя цвета. При дублении и обработке кожи в шкуры животных добавляют соль, чтобы подавить микробную активность на нижней стороне шкуры и привлечь влагу обратно в шкуры.Он также используется в пищевой промышленности, включая упаковку, консервирование, выпечку, а также производство молочных и зерновых продуктов. Соль используется в промышленности и переработке, включая разведку нефти и газа; при крашении тканей и обработке тяжелых металлов, таких как алюминий, бериллий, медь, сталь и ванадий. Кроме того, соль используется в производстве резины, в целлюлозно-бумажной промышленности, а также для увеличения твердости бетона в цементированных оболочках и для придания прочности фундаментам автомобильных мостов. Среди других применений соли — фармакологические продукты, ветеринарные препараты и т. Д.и таять зимой во многих холодных странах снег.

      Соль в настоящее время массово производится путем испарения морской воды или рассола из солевых колодцев и соленых озер. Добыча каменной соли также является важным источником. Китай — главный мировой поставщик соли. В 2010 году мировое производство оценивалось в 270 миллионов тонн, при этом в пятерку крупнейших производителей (в миллионах тонн) входили Китай (60,0), США (45,0), Индия (20,0), Германия (16,5) и Канада (14,0).

      В контексте Сомалиленда и региона использование соли будет ограничено несколькими потребностями, включая поваренную соль, базовую пищевую обработку, дубление кожи и текстиль из-за отсутствия в стране какой-либо значимой промышленной базы.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *